Viabilidade e capacitação espermáticas, geração de peróxido de hidrogênio(H2O2) e lipoperoxidação no sêmen ovino adicionado de plasma seminal ou antioxidante após a criopreservação

Abstract

Objetivou-se avaliar a adição de plasma seminal e dos antioxidantes, catalase e Trolox, ao sêmen ovino após sua congelação e descongelação. Constituíram–se quatro grupos, CO (controle - com adição de 200µL PBS), CAT (catalase - 12,5 mg/mL = 8 µL + 162 µL PBS), TRO (Trolox - 100 µMol/ 100 x 106 sptz = 3,4 µL + 166,6 µL PBS), PS ( 60% de plasma seminal em PBS = 200 µL) em que os aditivos foram acrescidos (v/v) na proporção de 1:1, às amostras de sêmen criopreservado de 13 carneiros. Os parâmetros de cinética espermática determinados através da análise computadorizada (CASA), a integridade de membrana avaliada pela combinação das sondas fluorescentes Iodeto de Propídeo e Diacetato de Carboxifluoresceína, bem como a capacitação espermática constatada pelo ensaio da Clortetraciclina não foram influenciados pelo tratamento (P>0,05). A adição de plasma seminal teve um efeito deletério sobre a lipoperoxidação avaliada pela produção de TBARS (substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico), e geração de peróxido de hidrogênio (H2O2) pelo método do Phenol Red de H2O2. O Trolox foi efetivo em controlar a produção de TBARS nos sistema geradores (adição de +FeSO4). Uma vez que a adição de antioxidantes foi benéfica, por prevenir a formação adicional de TBARS e geração de H2O2 no sistema gerador, sua utilização em sêmen ovino após a criopreservação pode ser indicada, principalmente em situações de maior desafio oxidativo.

The aim of this study was to evaluate the addition of the antioxidants, catalase e Trolox, and the seminal plasma in frozen thawed ram semen. Four groups was established, CO (control 200 µL PBS), CAT (catalase - 12,5 mg/mL = 8 µL + 162 µL PBS), TRO (Trolox - 100 µMol/ 100 x 106 sptz = 3,4 µL + 166,6 µL PBS), PS ( 60% of seminal plasma in PBS = 200 µL) added in the proportion of 1:1 (v/v) in cryopreserved semen of 13 rams.The spermatozoa kinematics was determined by CASA, the membrane integrity was determined by the combination of the fluorescent probes Propidium Iodide and Carboxyfluorescein, and the capacitation status was assessed by Chlortetracycline assay. No statistic difference were found for these parameters (P>0,05).The addition of seminal plasma was deleterious on lipid peroxidation analysed by the production of TBARS (thiobarbituric acid reactive species) and on the generation of hydrogen peroxide (H2O2) assessed by Phenol Red assay. An effective effect was found in the production of TBARS in the addition of Trolox in the generation system (addition of +FeSO4). Once the addition of antioxidants were beneficial in prevent de additional generation of TBARS and H2O2 in the generator system, they can be use after the cryopreservation of ram semen, especially in case of oxidative stress.