Pesquisa de Micobacterium Leprae e outras microbactérias em Tatus Selvagens

Abstract

A hanseníase é, ainda hoje, um problema global de saúde pública. O Brasil e a Índia são os países com maior prevalência da doença. A existência de tatus Dasypus novemcinctus naturalmente infectados por Mycobacterium leprae foi relatada nos Estados Unidos, México, Argentina e no Brasil, no Estado do Espírito Santo. Micobactérias potencialmente patogênicas e algumas ambientais já foram isoladas destes animais. A identificação do bacilo é dificultada, particularmente pela sua incapacidade de crescimento in vitro. Portanto, o uso de ferramentas moleculares representa uma alternativa mais rápida e sensível para diagnóstico de micobacterioses. Neste trabalho foram feitas baciloscopia, cultura e PCR com primers específicos para seqüências repetitivas de M. leprae, a partir de DNA extraído de amostras de fígado, baço, linfonodos e pele de 21 tatus D. novemcinctus, Euphractus sexcintus e Cabassous tatouay provenientes da região Centro-Oeste do Estado de SP, dos quais 17 eram provenientes do Banco de DNA do Laboratório de Biologia de Fungos do Departamento de Microbiologia e Imunologia - IBB. Para a padronização da metodologia foram utilizados hamsters experimentalmente infectados por M. avium e o modelo experimental para hanseníase (D. novemcinctus) do Biotério de Experimentação Animal do Instituto Lauro de Souza Lima, Bauru-SP. Com exceção de dois tatus, cujas amostras fezes foram positivas pela PCR, nenhum tatu selvagem apresentou infecção natural por micobactérias. Somente o tatu inoculado com biópsia de paciente virchowiano foi positivo, tanto na PCR, quanto no seqüenciamento genômico, que revelou 100% de identidade com o M. leprae. Os resultados preliminares deste estudo, com base na metodologia empregada, sugerem que existe um indicativo de que os tatus selvagens podem apresentar papel de reservatório de M. leprae na cadeia epidemiológica da doença, na região estudada.

Leprosy is still a worldwide public health problem. Brazil, in addition to India, show the highest prevalence rates of the disease. Natural infection of armadillos Dasypus novemcinctus with Mycobacterium leprae has been reported in the United States, Mexico, Argentina and Brazil, in the State of Espírito Santo. Potentially pathogenic and ambiental mycobacteria have been isolated from these animals. Identification of bacilli is difficult, particularly because its inability to grow in vitro. The use of molecular tools represent a fast and sensitive alternative method for diagnosis of mycobacteriosis. In the present study, the diagnostic methods used were bacilloscopy, culture and PCR using specific primers for M. leprae repetitive sequences. The PCR were performed using genomic DNA extracted from liver, spleen, lymphnodes and skin of 21 D. novemcinctus, Euphractus sexcintus and Cabassous tatouay armadillos from the Middle Western region of the State of São Paulo. From those, 17 samples were taken from the DNA Bank of the Fungal Biology Laboratory at Department of Microbiology and Immunology IB - Botucatu, UNESP. Standardization of the technique was done in M. avium experimentally infected hamsters and M. leprae experimentally infected D. novemcinctus tissue from the Laboratory Animal House at Instituto Lauro de Souza Lima, Bauru-SP. No one of the wild armadillos showed natural mycobacterial infection. Only the armadillo inoculated with material collected from untreated multibacillary leprosy patient was PCR positive. The genomic sequencing revealed 100% identity with M. leprae. According to these preliminary studies, based on the methodology, we may conclude that wild armadillos seem play a role on epidemiology of leprosy in the Middle Western region of the State of São Paulo.