Efeitos imunomodulatórios do P-MAPA em cães naturalmente infectados com leishmaniose visceral

Abstract

O presente estudo investiga in vitro a ação leishmanicida do imunomodulador fosfolinoleato-palmitoleato de magnésio e amônio proteico (PMAPA) e sua ação citotóxica em células mononucleares, e in vivo seu efeito imunomodulador em cães naturalmente infectados por Leishmania spp. Para avaliar a viabilidade celular após a ação do P-MAPA utilizou-se o ensaio colorimétrico com (3 - (4,5-dimetil-2-il) -2,5-difenil tetrazolium brometo (MTT), onde células mononucleares derivadas de sangue periférico foram cultivadas com diferentes concentrações de P- MAPA; 0, 50, 100 e 200 μg/mL em ambiente úmido a 37°C, com 5% de CO2 por 72 horas. A ação leishmanicida do imunomodulador foi avaliada pelo mesmo método utilizando-se a forma promastigosta de Leishmania (L.) chagasi. Para avaliar a ação terapêutica do PMAPA, vinte cães sem raça definida, com sintomas clínicos compatíveis com leishmaniose e positivos na detecção de anticorpos anti-leishmania pelo método ELISA, foram tratados. Dez cães receberam 15 doses do imunomodulador (2,0 mg/kg), por via intramuscular, e dez receberam solução fisiológica como placebo. Os grupos foram acompanhados para observação da remissão de sinais clínicos, no grupo tratado e controle foram colhidas amostras de pele antes e após a administração do imunomodulador para quantificação da carga parasitária, ao final do tratamento amostras de sangue periférico foram utilizadas para o isolamento de mononucleares e investigação do perfil linfocitário do tipo T e produção das citocinas IL-10, IFN-gama e IL-2 em sobrenadante de cultura celular. A quantificação da carga parasitária nas amostras de pele foi realizada pelo método da PCR em tempo real. O perfil linfocitário do tipo T foi realizado por citometria de fluxo, e a quantificação das citocinas em sobrenadante de cultura...

This study investigates the in vitro leishmanicidal action of the immunomodulator-phospholinoleate palmitoleato magnesium and ammonium protein (P-MAPA) together with its cytotoxic action in mononuclear cells. It also investigates, in vivo, its immunomodulatory effect in dogs naturally infected by Leishmania spp. To assess cell viability after the action of P-MAPA, the colorimetric assay with (3 - (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) was used. There mononuclear cells derived from peripheral blood and were cultured with different concentrations of P-MAPA, 0, 50, 100 and 200 μg/mL in a humid environment at 37 ° C with 5% CO2 for 72 hours. The leishmanicidal action of immunomodulators was evaluated using the same method to form promastigosta of Leishmania (L.) chagasi. To assess the therapeutic action of P-MAPA, twenty mongrel dogs, with clinical symptoms compatible with leishmaniasis and positive detection of anti-leishmania antibodies by ELISA assay were treated. Ten dogs received 15 doses of the immunomodulator (2.0 mg / kg) intramuscularly, and ten received saline solution as placebo. The groups were followed for observation of clinical signs of remission; in the both groups, skin samples were collected before and after administration of the immunomodulator to quantify the parasite load. At the end of treatment, peripheral blood samples were used for the isolation of mononuclears, the profile investigation of type T lymphocytes, together with the production of IL-10, IFN-gamma and IL-2 cytokines in cell culture supernatant. The quantification of parasite load in the samples was performed by PCR in real time. The profile of type T lymphocytes was performed by flow cytometry, and quantification of cytokines in culture supernatants by ELISA capture... (Complete abstract click electronic access below)