Principais marcadores utilizados na avaliação da qualidade do sêmen de animais domésticos

Abstract

Methods of semen cryopreservation allow changes in spermatic cells, such as damage in plasma and acrossomal membrane and modifications in mitochondrial function due to a disorder in the lipidic bilayer. For effective oocyte fertilization, spermatozoa require functional competent membranes, and intact organelles, acrosome and DNA. However, most laboratory methods used to evaluate semen quality are not highly correlated with fertilizing capacity. The discovery of a variety of fluorochromes and compounds conjugated to fluorescent probes has enabled an accurate assessment of the viability, integrity and function of spermatozoa. Among the most used probes that label the various compartments of the sperm cell there are the membrane impermeable fluorescent dyes to test the membrane integrity, as well as acylated dyes that pass the intact membrane. For the acrossomal integrity the most commonly used method is lectins labeled by a fluorescent probe. The acrosome reaction and spermatic capacitation is detected by the evaluation of membrane architecture and disorder of lipids in plasma membrane. Mitochondrial function can be determined using markers for their aerobic activity. The DNA status of spermatozoa has been determined using the metachromatic properties of Acridine Orange, and the DNA fragmentation can also be assessed by TUNEL assay. Finally, DNA condensation is analyzed using a single cell DNA gel electrophoresis assay that indicates DNA compactation. This monograph aims to compile the various tests used to detect damaged spermatozoa under cryopreservation methods, searching for improve the predictive value of semen analysis with the intention of a successful conception

O processo de congelação do sêmen proporciona alterações na integridade e na funcionalidade das células espermáticas, tais como danos à membrana plasmática e acrossomal e alterações na função mitocondrial, devido à desorganização da bicamada lipídica que compõe a membrana espermática. Para que ocorra a efetiva fertilização do oócito pelo espermatozóide, é necessário que a célula espermática apresente membranas funcionais e íntegras. Da mesma forma suas organelas, o acrossomo e o DNA têm de permanecer intactos. Porém, muitos métodos laboratoriais usados para avaliar a qualidade do sêmen não apresentam alta correlação com a capacidade de fertilização e a descoberta de fluorocromos e compostos conjugados com sondas fluorescentes possibilitaram um exame mais acurado da integridade, viabilidade e função do espermatozóide. Dentre as sondas mais utilizadas para a avaliação dos vários compartimentos da célula espermática estão listados corantes impermeáveis à membrana plasmática para demonstrar sua integridade, bem como corantes que passam através da membrana intacta e perdem um grupo acil passando a emitir fluorescência. Para avaliação da integridade acrossomal é comum o uso das lecitinas conjugadas com uma sonda fluorescente. A detecção da reação acrossomal e da capacitação espermática pode ser realizada através da análise de alterações na distribuição dos fosfolipídios da membrana. A função das mitocôndrias é determinada através do uso de sondas que avaliam a funcionalidade destas organelas em condições aeróbicas. A estrutura do DNA espermático tem sido determinada através do uso das propriedades metacromáticas do Acridina Orange, e a fragmentação do DNA é avaliada pela técnica do TUNEL, que identifica fragmentos de DNA pela marcação de terminais 3’-OH livres. Finalmente, a condensação do DNA, importante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)