Viabilidade do sêmen congelado obtido do epidídimo de touros post-mortem

Abstract

The objective of this study was to evaluate the effects of freezing on the integrity and functionality of bovine epididymal spermatozoa collected postmortem. Ten pairs of testicle epididymis of bulls from a commercial slaughterhouse were used. On the laboratory, the testicle was separated and the semen was collected from the tail of epididymis on a petri dish heated containing a medium (Botubov ®, Botupharma, Botucatu, SP). Then, the semen was evaluated to motility, vigor, concentration, morphology, DNA integrity, mitochondrial activity, viability, membrane integrity and functionality. The semen was diluted in commercial extender (Botubov ®, Botupharma, Botucatu, SP) at a concentration of 100x106 sperm/mL. Thereafter, the samples were packaged in straws 0.5 mL, chilled at 4° C, for 4 hours, frozen in polystyrene box, at 6 cm from level of liquid nitrogen, during 20 minutes and stored in cryogenic container. The samples were thawed at 37°C for 30 seconds. After thawing, the semen was reevaluated to the same parameters, except sperm concentration and volume. Comparison of results between fresh and frozen semen showed means were increased (p<0.05) fresh semen motility (74,0 ± 7,0% versus 30,0 ± 8,2%), vigor (3,6 ± 0,7 versus 1,3 ± 0,5), membrane integrity (fluorescence, 95,6 ± 3,1% versus 75,7 ± 5,9%) and index of mitochondrial activity (99,3 ± 6,6 versus 40,0 ± 6,3), respectively. In conclusion, the viability of frozen semen obtained from the epididymis of bulls is similar than ejaculated semen, making the collection technique commercially applicable.

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da congelação sobre a integridade e funcionalidade de espermatozoides colhidos do epidídimo de touros post-mortem. Foram utilizados 10 pares de testículos de touros provenientes de um abatedouro comercial. No laboratório, o sêmen foi colhido da cauda do epidídimo sobre uma placa de Petri aquecida, contendo meio diluente sem glicerol (Botubov® - meio I, Botupharma, Botucatu, SP). O sêmen foi então avaliado quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática, integridade de DNA, atividade mitocondrial, viabilidade, integridade e funcionalidade da membrana. Após a avaliação, o sêmen foi diluído em meio comercial contendo glicerol (Botubov® - meio II, Botupharma, Botucatu, SP), em uma concentração de 100x106 de espermatozoides/mL. Ato contínuo, as amostras foram envasadas em palhetas de 0,5 mL, refrigeradas a 4ºC, durante 4 horas, congeladas em caixa de poliestireno expandido, a 6cm do nível de nitrogênio líquido, durante 20 minutos e, posteriormente, armazenada em botijão criogênico. As amostras foram descongeladas a 37°C, durante 30 segundos. Após a descongelação, o sêmen foi reavaliado para os mesmos parâmetros, com exceção da concentração espermática e volume. Quanto à comparação dos resultados entre o sêmen fresco e congelado, estes foram superiores (p<0,05) no sêmen fresco quanto à motilidade (74,0 ± 7,0% versus 30,0 ± 8,2%), vigor (3,6 ± 0,7 versus 1,3 ± 0,5), integridade de membrana (fluorescência, 95,6 ± 3,1% versus 75,7 ± 5,9%) e índice de atividade citoquímica mitocondrial (99,3 ± 6,6 versus 40,0 ± 6,3), respectivamente. Concluiuse que a viabilidade do sêmen congelado obtido do epidídimo de touros é semelhante à do sêmen ejaculado, tornando a técnica de colheita aplicável comercialmente.