Identification of haploid maize by flow cytometry, morphological and molecular markers

Abstract

O desenvolvimento de linhagens homozigotas em milho pode ser acelerado por meio do uso de haploides. Para isso, a obtenção e identificação prévia dos haploides gerados pelas linhagens indutoras de haploidia é um fator importante. O objetivo do trabalho foi identificar haplóides por meio de citometria de fluxo para então correlacionar o conteúdo de DNA nuclear aos caracteres morfológicos e morfométricos das sementes que os originaram. Além disso, marcadores moleculares foram utilizados para confirmar a natureza androgenética do haploide. As sementes obtidas foram provenientes do cruzamento entre a linhagem W23 e o híbrido comercial P30F90. Dentre essas sementes, foi selecionado um grupo, possíveis haplóides, cujo embrião era branco e o pericarpo arroxeado. Esse grupo, constituído de 330 sementes, foi caracterizado quanto à morfologia, morfometria e conteúdo de DNA nuclear. As análises de citometria de fluxo identificaram quatro haploides, e todos eles apresentaram porte reduzido e folhas quebradiças. Os pesos, comprimentos, espessuras e larguras das sementes haplóides variaram muito, indicando que caracteres morfométricos não são eficientes para a seleção visual de haploides. Baseado nos resultados, a linhagem W23 induz haplóides em milho mesmo em condições tropicais. Os marcadores moleculares microssatélites (SSR) mostraram-se eficientes, comprovando o caráter androgenético dos haploides.

The development of homozygous breeding lines in maize may be accelerated through the use of haploids. Thus, the obtaining and prior identification of haploids generated by the haploid inducer lines is an important factor. The purpose of this study was to identify haploids by flow cytometry and to correlate the nuclear DNA content to the morphological and morphometric traits of the seeds that gave rise to them. In addition, molecular markers were used to confirm the androgenetic nature of the haploid. The seeds obtained were derived from the cross between the inbred line W23 and the commercial hybrid P30F90. Among these seeds, a group was selected, putative haploids, whose embryo was white and the pericarp purplish. This group, consisting of 330 seeds, was characterized based on seed morphology, seed morphometry and nuclear DNA content. Flow cytometry analyses identified four haploids, and all of them were small size plants and had brittle leaves. The weight, length, thickness and width of the haploid seeds were very variable indicating that morphometric traits do not constitute reliable data for visual selection of haploid seeds. Based on results, the inbred line W23 induced haploid maize even under tropical conditions. Microsatellite molecular markers (SSR) proved to be efficient, confirming the androgenetic trait of the haploids.