Influência da terapia fotodinâmica sobre a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 na carcinogênese mamária

Abstract

A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica utilizada para o tratamento de neoplasia maligna que induz a morte celular por necrose ou apoptose. Estudos in vitro e in vivo são realizados para avaliar o sucesso da terapia, bem como as respostas e alterações celulares ocorridas. Esse trabalho tem por objetivos avaliar a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 e de suas proteínas, relacionados à proliferação celular e apoptose, na eficácia da TFD, avaliar qualitativamente o grau de necrose causado pela TFD em diferentes doses e validar a técnica de PCR em tempo real com a imunohistoquímica em tumores de mama tratados por TFD. Para tal 28 ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD) receberam dose única de DMBA (80mg/kg, via gavagem) para indução do tumor de mama, quando da manifestação clínica da neoplasia foi realizado exame citológico e os animais foram divididos em 4 grupos G1: grupo controle, tumor de mama não tratado; G2 tratado com TFD utilizando-se iluminação intersticial com dose de luz de 50J/cm; G3 dose de luz de 100J/cm, G4 dose de luz de 150J/cm. Amostras dos tumores foram colhidas para realização de exame histopatológico, imuno-histoquímica e qRT-PCR. Através da imuno-histoquímica observou-se que os tumores mamários induzidos químicamente em ratas SD superexpressam Bcl-2 e Bax e tem baixa expressão de Her-2 e que isso não se altera com os diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado com o grupo controle (G1). Já através do qRT-PCR observou –se que o padrão de expressão de BCL-2, BAX e HER-2 não se altera nos diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado ao controle (G1). Não há evidência estatística de que a TFD influencie a expressão proteíca e gênica de Bcl-2, Bax e Her-2 nas condições do experimento

Photodynamic therapy (PDT) is a therapeutic procedure used to treat malignancy which induces cell death by necrosis or apoptosis. In vitro and in vivo are performed to evaluate the success of therapy, as well as the responses and cellular changes that occur. This study aims to evaluate the expression of genes BCL-2, BAX and HER-2 and its protein related to cell proliferation and apoptosis in the efficacy of PDT, qualitatively assess the degree of necrosis caused by PDT at different doses and validate the technique of real time PCR with immunohistochemistry in breast tumors treated by PDT. For this 28 Wistar female Sprague-Dawley (SD) received a single dose of DMBA (80mg/kg by gavage) for induction of breast tumor, when the tumor clinical cytological examination was performed and the animals were divided into 4 groups G1: control group, untreated breast tumor; G2 treated with PDT using interstitial illumination with light dose of 50J/cm; G3 dose 100J/cm light, G4 light dose of 150J/cm. Samples of tumors were harvested for histological examination, immunohistochemistry and qRT-PCR. By immunohistochemistry it was found that the chemically induced mammary tumors in female rats SD overexpress Bcl-2 and Bax and has low expression of Her-2, and it does not change in either group (G2, G3 and G4) compared with the control group (G1). Already using the qRT-PCR showed that the expression pattern of BCL-2, BAX and HER-2 is not changed in different treatments (G2, G3 and G4) compared to control (G1). There is no statistical evidence that PDT influence the expression of gene and protein of Bcl-2, Bax and Her-2 in the experimental conditions