Infecção experimental de ratos (Rattus norvegivus) da linhagem Lewis por Strongyloides venezuelensis: dinâmica da infecção, uso de PCR para detecção do parasita e caracterização da resposta imune humoral

Abstract

No presente estudo foram analisadas a dinâmica da infecção primária por Strongyloides venezuelensis em ratos Lewis, a influência do sexo do hospedeiro e sua resposta imune. Também foi comparada a sensibilidade da PCR com as técnicas histológica e parasitológica na caracterização desta infecção utilizando amostras de tecidos e fezes, respectivamente. No primeiro artigo, o número de ovos por grama de fezes (OPG) foi determinado pela técnica de McMaster modificada e o DNA foi extraído para análise por PCR. Comparou-se a sensibilidade de ambos os métodos para o diagnóstico do parasita em fezes de ratos inoculados com 40, 400 e 4000 larvas infectantes (L3) e essas infecções foram consideradas leve, moderada e grave, respectivamente. Na PCR dois pares de primers foram empregados, um foi desenhado a partir da seqüência parcial de rDNA de S. venezuelensis e o outro, amplifica o rDNA de diversas espécies deste gênero. Nas amostras oriundas dos animais com infecção leve o primer específico não detectou DNA, já o primer gênero apresentou maior sensibilidade que a quantificação de OPG. No segundo artigo foi analisada a influência do sexo dos hospedeiros na suscetibilidade às infecções leve, moderada e pesada. Machos com infecção moderada e pesada apresentaram maior média de OPG e de número de parasitas recuperados do intestino delgado em comparação com as fêmeas, porém esse fenômeno não foi observado nas infecções leves. No terceiro artigo, os animais foram inoculados com 4000 L3 para a avaliação da dinâmica da infecção e caracterização da resposta imune durante as fases aguda e de recuperação. A dinâmica da infecção foi monitorada, diariamente, por OPG durante 32 dias. A infecção apresentou período pré-patente de seis dias e picos de eliminação de ovos no oitavo e no 11º dias. Ambos os anticorpos específicos IgG1 e IgG2b apresentar...

In the present study the dynamics of Strongyloides venezuelensis primary infection in Lewis rats, the host sex influence and its immune response were analyzed. We also compared the sensitivity between PCR, parasitological and histological techniques to characterize this infection using feces and tissue samples. In the first paper the number of eggs per gram of feces (EPG) using a McMaster modified technique was enumerated and DNA was extracted to do PCR analysis. Sensitivity of both methods to diagnosis the parasite in feces of rats inoculated with 40, 400 or 4000 infective larvae (L3) was compared. These infections were considered light, moderate and heavy, respectively. Two PCR primer pairs were employed, a specific one was designed from a S. venezuelensis rDNA partial sequence and the other one amplifies several species within this genus. In light infection, the specific primer did not detect DNA in any sample, in the other hand the genus primer presented higher sensitivity than EPG. The host sex influence in susceptibility to light, moderate and heavy infection was evaluated in the second experiment. The FEC means and the mean parasite infection intensity were higher in males than in females in animals with moderate and heavy infection. But this phenomenon was not observed in light infection. In the third paper, animals were inoculated with 4000 L3 to determine the kinetics infection and to characterize the immune response during acute and recovery phases. The kinetics of infection was daily measured by FEC during 32 days after infection. Parasite eggs were detected in the feces for the first time at day 6 post-infection, but the maximal egg number was observed at days 8 and 11 post-infection. Both IgG1 and IgG2b specific antibodies were elevated at the acute phase and there was a significant increase of IgG1 concentration in the recovery one. IgE and IL-10 also presented a high... (Complete abstract click electronic access below)