Determinação de ocratoxinas em cervejas, por injeção direta, empregando cromatografia líquida de alta eficiência

Abstract

As investigações sobre a incidência de micotoxinas em alimentos são de suma importância para que esforços possam ser concentrados na prevenção, controle e na destoxificação dos produtos susceptíveis a esse tipo de contaminação. Dentre as micotoxinas existentes, a ocratoxina A, produzida por Aspergillus ochraceus, e Penicillium verrucosum é nefrotóxica, e o seu alvo secundário é o fígado. Esta micotoxina, que também apresenta atividade fortemente teratogênica em animais de laboratórios, tem sido encontrada em baixas concentrações em amostras de milho, soja, trigo, cevada, arroz, sorgo e amendoim. O brasileiro consome em média 46,8 litros de cerveja por ano, e esta tem como matéria-prima principal cevada, além de coadjuvantes como o milho e o arroz. Considerando-se que vários métodos analíticos, relatados na literatura, para a determinação das ocratoxinas A e B em diferentes tipos de amostras, sobretudo em bebidas, requerem o pré-tratamento da amostra (clean up) ou o emprego de colunas de imunoafinidade, foi desenvolvido um novo método analítico, por injeção direta da amostra de cerveja, empregando cromatografia líquida de alta eficiência, com uma coluna cromatográfica aniônica-ISRP (Internal Surface Reverse Phase). Assim foi possível efetuar a extração e pré-concentração on line da ocratoxina A (OTA) e ocratoxina B (OTB) presentes em amostras reais de cervejas. Os resultados obtidos indicaram que o método proposto é eficiente para a detecção e quantificação de OTA e OTB em cervejas. A avaliação da ocorrência destas ocratoxinas em cervejas comercializadas em Bauru e região mostraram que 7,1 % das amostras de cervejas nacionais, num total de 42 amostras, e 11,0 % das cervejas importadas num total de 09 amostras, estavam contaminadas com OTA. A OTB não foi detectada nas amostras de cervejas importadas.

The investigations on the incidence of mycotoxins in food are crucial in order that the effords can be concentrated on prevention, control, and on the de-toxication of the products susceptible to this kind of contamination. Among the existent mycotoxins, the ochratoxins A, produced by Aspergillus ochraceus, Penicillium verrucosum and Peniciliumnomis, is nephrotoxic, and its secundary target is the liver. This mycotoxin, which also presents an activity strongly teratogenic in laboratory animals, has been found, in low concentrations, in corn, soy, wheat, barley, rice, sorghum, and peanuts samples. Brasilian people have an average ingestion of 4.8 litters of beer yearly, and beer, has as the main raw material, barley, besides corn and rice. Considering that various analytical methods reported in the literature for determining the ochratoxins A and B, in different types of samples, particularly in alcoholic beverages, require the pretreatment [clean-up] of the sample or the immunoaffinity columns,this present study proposed the development of a new analytic method, by direct injection of the beer sample, employing the high efficiency liquid chromatography, with an anionic chromatographic column ISRP(Internal Surface Reverse Phase), which possibilitate to carry out the extraction and pre-concentration on line of the Ochratoxin A (OTA) and Ochratoxin B (OTB) present in real beer samples, without the presence of interferent peaks. This study results indicated that the proposed method is effective for detection and quantitification OTA and OTB in beers. The survey of these ochratoxins occurrence in beers marketed in Bauru, and region (Sao Paulo State, Brazil), showed that 7.1% of the ochratoxins of national beers and 11.0% of the imported beers were contaminated by OTA. OTB was not detected in imported beers samples.