Expressão gênica das isoformas do receptor do hormônio luteinizante(LHR) em células células da granulosa antes, durante e após o desvio folicular em novilhas Nelore

Abstract

Objetivou-se com o presente trabalho, avaliar a expressão das isoformas do LHR nas células da granulosa de novilhas da raça Nelore (Bos taurus indicus), antes, durante e após o desvio folicular. Para caracterizar o momento do desvio folicular (Experimento 1, primeira etapa), novilhas Nelore (n=20) foram submetidas ao seguinte protocolo de sincronização da ovulação: no D-10 receberam um dispositivo intravaginal liberador de progesterona (1,0 g, DIB®,), associado a aplicação de benzoato de estradiol (BE, 2,5 mg, Estrogin®, via IM). O dispositivo intravaginal foi removido no D-3 e os animais receberam uma aplicação de PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, IM). Vinte e quatro horas mais tarde administrou-se 1,0 mg de BE (via IM) e a partir deste momento, o crescimento do folículo dominante foi acompanhado através de exame ultrasonográfico (US, Aloka SSD 900; transdutor de 7,5 a 9,0 MHz, Japan), realizado a cada 12 horas até 144 horas após a ovulação. Na segunda etapa deste experimento avaliou-se a expressão das isoformas do LHR (M1, M2, M3 e M4) nas células da granulosa de folículos obtidos antes, durante e após o momento esperado para ocorrência do desvio folicular. As mesmas novilhas utilizadas anteriormente foram submetidas ao protocolo de sincronização da ovulação descrito acima e separadas em 3 grupos (segunda etapa): Grupo 2 (G2, 2 dias após a ovulação, n=7), Grupo 2,5 (G2,5, 2,5 dias após a ovulação, n=7) e Grupo 3 (G3, 3 dias após a ovulação, n =7). Os animais foram abatidos 2,0, 2,5 e 3 dias após a ovulação para remoção dos ovários e as células da granulosa, coletadas dos folículos ovarianos, foram separadas para a extração do RNA total com Trizol. A expressão gênica das isoformas de LHR foi mensurada por RT-PCR semi-quantitativo. No experimento 2, um outro lote de novilhas Nelore (n=21) foi submetidos aos procedimentos,...

The main objective of the present work was to evaluate the expression of LHR isoforms in granulosa cells from Nelore heifers, before, during and after follicule deviation. To characterize the time of follicle deviation (Experiment 1, phase 1), Nellore heifers (n=20) were submitted to the following synchronization protocol: at Day -10 (D -10) they received an intravaginal progesterone releasing device (1.0 g, DIB®) and estradiol benzoate (BE, 2.5 mg, Estrogin®, i.m.). Intravaginal device was removed on D -3 and animals received PGF2a (d-cloprostenol, 500 mg, Prolise®, i.m.). Twenty four hours afterwards 1.0 mg de BE (i.m.) was administered and follicular growth of the dominant follicle was registered by ultrasonography (US, Aloka SSD 900; 7.5 to 9.0 MHz probe) performed every 12 h until 144 h after ovulation. In the second phase of this experiment expression of isoforms of LH receptors (M1, M2, M3 and M4) from granullosa cells obtained from follicles before, during and after the expected time of follicle deviation, were evaluated. The same heifers used on phase 1 were submitted to the protocol described above to synchronize ovulation, and randomly allocated in three groups (phase 2): Group 2 (G2, 2 days after ovulation, i.e., before the expect time of deviation, n=7), Group 2.5 (G2.5, 2.5 days after ovulation, i.e., during deviation, n=7) and Group 3 (G3, 3 days after ovulation, i.e., after deviation). The animals were slaughtered 2.0, 2.5, and 3 days after ovulation to remove the ovaries, and granullosa cells from ovarian follicles were separated for total RNA extraction with Trizol. Gene expression of LHR isoforms were determined by RT-PCR. In experiment 2, another group of Nellore heifers (n=21) was exposed to the same procedures described in the second phase of experiment 1, to increase the number of samples from granullosa cells that expressed LHR isoforms. In experiment 1 (phase 1),...(Complete abstract, click electronic access below)