Técnicas avançadas na análise de alterações morfo-funcionais de sêmen equino

Abstract

As biotécnicas de refrigeração e congelação podem causar danos irreversíveis à célula espermática devido ao estresse gerado pela queda de temperatura ou, no caso da criopreservação, pela formação de cristais de gelo intracelulares. Estas alterações resultam na diminuição da longevidade do espermatozóide no trato reprodutor da fêmea e, conseqüentemente, na queda dos índices de fertilidade. Sabendo-se que as alterações das características espermática afetam a viabilidade do sêmen sobre as diferentes formas de preservação seminal e que garanhões de diferentes taxas de fertilidade nem sempre apresentam diferenças significativas nas análises seminais padrões, faz-se necessário uma análise mais específica da células espermática, como a avaliação de vários parametros funcionais em células individuais, o que possivelmente reduziria as incertezas inerentes a previsão da fertilidade na avaliação in vitro do sêmen. Para comprovação desta hipótese três experimentos foram realizados. No experimento 1 o objetivo foi identificar e avaliar as principais modificações ocorridas nas características morfofuncionais do sêmen equino estocado a temperatura ambiente (18-22ºC) por um período de 12 horas. No experimento 2 o objetivo foi verificar a possibilidade de modular estas alterações através de duas temperaturas de refrigeração (5ºC e 15ºC), e, no experimento 3, o objetivo foi avaliar e verificar a relação destas alterações com os índices de fertilidade em sêmen congelado. Para os experimentos 1 e 2, três ejaculados de seis diferentes garanhões foram avaliados quanto a cinética espermática através da análise computadorizada do movimento espermático; para a avaliação morfofuncional foram avaliadas a integridade das membranas plasmática...

Cooling and freezing can cause irreversible damage to sperm cells due to the stress generated by the decrease in temperature or, in the case of cryopreservation, the formation of intracellular ice crystals. These changes result in decreased longevity of sperm in the female reproductive tract and, consequently, a decrease in fertility rates. The changes in sperm characteristics affect the viability of the semen, and these changes vary based on the different preservation techniques used to preserve the semen from different stallions. In addition, fertility rates do not always show significant differences in semen analysis patterns. Therefore, a more specific analysis of sperm cells is necessary. This analysis should include a functional assessment of multiple parameters in individual cells, which might reduce uncertainties in the prediction of fertility based on the in vitro evaluation of semen. To test this hypothesis, three experiments were performed. In experiment 1, the objective was to identify and assess the main characteristic morph functional changes in equine semen that is stored at room temperature (18-22°C) for a period of 12 hours. In experiment 2, the objective was to determine the possibility of modulating these changes using two refrigeration temperatures (5°C and 15°C). In experiment 3, the objective was to evaluate and compare the influence of these changes on fertility rates between semen at various temperatures and in frozen semen. For experiments 1 and 2, the sperm kinetics of three different ejaculates from six stallions were evaluated using a computerized analysis of sperm motility. For morphological and functional assessments, the following parameters were evaluated: plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential, rate of DNA fragmentation, caspase activation and... (Complete abstract click electronic access below)