Expressão gênica, caracterização eletroforética e análise ultraestrutural de embriões e tecido materno de cadelas gestantes e não gestantes

Abstract

Este trabalho teve como objetivo investigar a expressão dos receptores hormonais: estrógeno beta (ER-β), estrógeno alpha (ER- α), progesterona (PR), ocitocina (OTR) e também do fator inibidor de leucemia (LIF) e seu receptor (LIFR) e da osteopontina (OPN) em embriões e tecido materno durante diestro gestacional e cíclico, realizar a análise ultra-estrutural de embriões e tecido materno e avaliar o perfil protéico de lavados uterinos e tubáricos de fêmeas gestantes e não gestantes. Foram utilizadas 24 fêmeas separadas em – GRUPO I- subdividido em: Grupo IA - 05 fêmeas submetidas à OSH aos 8 dias de gestação; Grupo IB - 05 cadelas submetidas à OSH aos 12 dias de gestação e Grupo IC - 05 cadelas submetidas à OSH 21 dias de gestação e Grupo ID- 4 cadelas submetidas a cesariana 60 dias de gestação. O GRUPO II- 05 cadelas, não inseminadas, que foram submetidas a OSH, 12 dias após a onda pré-ovulatória de LH. Para a expressão gênica foi usada a técnica de qRT- PCR, em tecido materno e em embriões dos Grupos I e II. Para a caracterização eletroforética das proteínas do lavado uterino e tubárico foi utilizada a técnica de eletroforese unidimensional. Na avaliação ultraestrutural dos embriões e tecido materno foi realizada a técnica de microscopia eletrônica de transmissão. Os genes ER-, PR, LIF-R foram expressos somente em blastocistos; não houve expressão de ER-, OPN e LIF e o gene OTR esteve presente tanto em mórulas quanto em blastocistos caninos. Os genes ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN e LIF foram expressos em tubas e útero de cadelas gestantes e não gestantes, sendo que somente o LIF-R foi mais expresso em útero e tuba de cadelas não gestantes. Somente a expressão do gene ER- β foi significativamente superior em tubas de...

We aimed to investigate the gene expression of leukemia inhibitory factor (LIF) and it receptor (LIFR), osteopontin (OPN) and hormonal receptors: estrogen beta (ER-β), estrogen alpha (ER-β), progesterone (PR) and oxytocin (OTR) in bicthes embryos and maternal tissue during cyclic and gestational diestrus. We also aimed to performed the ultrastructural analysis of bitches embryos and maternal tissue and evaluate the protein profile of uterine and oviducts washes in pregnant and non pregnant bitches. Twenty-for bitches were placed in: GROUP I subdivided in: Group IA – 05 females submitted to OVH at day 8 of pregnancy; GROUP IB - 05 females submitted to OVH at day 12 of pregnancy; GROUP IC – 05 females submitted to OVH at day 21 of pregnancy and GROUP ID – 05 females submitted to OVH at day 60 of pregnancy. And GROUP II - 05 females, not inseminated submitted to OVH 12 after the LH surge. For gene expression the qRT-PCR was used in embryos and maternal tissue at group I and II. For electrophoretic characterization of protein flushes from uterus and oviduct the unidimensional electrophoresis was used. The transmission electron microscopy technique was performed for the ultrastructural evaluation of embryos and maternal tissue. The ER-, PR, LIF-R genes were expressed only in blastocysts; there were no ER-, OPN e LIF expression and the OTR gene was present in both morula and blastocysts. The ER- α, ER- β, PR, OTR, LIFR, OPN and LIF genes were expressed in oviduct and uterus of pregnant and non pregnant bitches, however the LIF-R was more expressed in non pregnant females. Only the ER- β was more expressed in the oviduct of non pregnant femaleshas opposite to the OPN expression. Ultrastructural changes were observed during the embryo development. The uterine enviroment modified... (Complete abstract click electronic access below)