Caracterização genotípica de amaostras de Toxoplasma gondii isoladas de ovinos de abatedouro

Abstract

Toxoplasma gondii é um parasito de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, sendo importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. Este estudo objetivou determinar a soroprevalência de toxoplasmose em ovinos de abatedouros do estado de São Paulo, e a variabilidade genotípica dos isolamentos obtidos. A presença de anticorpos para T. gondii foi pesquisada em 602 amostras de soro pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), aglutinação direta modificada (MAT), com antígeno fixado pelo metanol (AM) e formalina (AF). Bioensaio em camundongos e pesquisa do DNA do parasito pela reação em cadeia pela polimerase (PCR) do gene 529 pares de bases (pb), repetitivo 300 vezes no genoma do parasito, foi realizado com cérebro, pulmão e músculo (“pool” de diafragma e coração) dos ovinos soropositivos. Das amostras positivas à PCR realizou-se a genotipagem pelas técnicas de multilocus-, nested-PCR e polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP-PCR) em 12 loci (SAG1, 5’SAG2, 3’SAG2, alt-SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico, CS3), adicionado de ROP18Del e ROP18UPS, além da confirmação do parasito pelo locus 18S rRNA, diferenciando de Hammondia hammondi, Neospora caninum, Sarcocystis neurona, S. moulei, S. miescheriana, S. hominis, S. capracanis e S. tenella. 66/602 (11,0%) amostras de soro foram positivas para algum teste sorológico, com maior sensibilidade da MAT-AF, utilizado como teste de triagem. Amostras teciduais de 20/66 (30,3%) animais foram positivas ao isolamento, sendo detectados cistos em 12, taquizoítos em quatro e somente sorologia positiva em outras quatro. Detectouse o DNA do parasito em amostras de 22/66 (33,3%) animais. O genótipo completo foi obtido em somente 13/22 (59,1%). Dez genótipos diferentes foram identificados, sendo seis novos genótipos...

Toxoplasma gondii is a parasite with high importance to the animal production and public health, being important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. This study was aimed to determine the seroprevalence of toxoplasmosis in ovines in slaughterhouses from State of de São Paulo, and the genotypic variability of the obtained isolates. T. gondii antibodies were researched in 602 serum samples by indirect fluorescent antibody test (IFAT) and modified agglutination test (MAT), with methanol- (AM) and formalin-fixed antigen (AF). Bioassay in mice and the research of DNA by polymerase chain reaction (PCR) of gene 529 base pairs (bp), 300 times repetitive in parasite genome, was assayed with brain, lung and muscle (“pool” of diaphragm and heart) from seropositive ovines. Genotyping of the PCR positive samples was performed by multilocus-, nested-PCR and restriction fragment lenght polymorphism (RFLP-PCR) in 12 loci (SAG1, 5’SAG2, 3’SAG2, alt-SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3), added of ROP18Del and ROP18UPS, beyond the confirmation by 18S rRNA locus, to differentiate Hammondia hammondi, Neospora caninum, Sarcocystis neurona, S. moulei, S. miescheriana, S. hominis, S. capracanis and S. tenella. 66/602 (11.0%) serum samples were positive to, at least, one serological test with high sensitivity to MAT-AF, used as screening test. Tissue samples of 20/66 (30.3%) animals were positive to the isolation, being detected cysts in 12, tachyzoites in four and in other four only positive result to the serology. DNA of the parasite was detected in samples of 22/66 (33.3%) animals. The complete genotype was detected in only 13/22 (59.1%). Ten different genotypes were identified, with six new genotypes. Two samples presented type II, isolated from Polwarth (Ideal) breed, bred extensively in Santana do Livramento and Uruguaiana, RS. Two other samples, from... (Complete abstract click electronic access below)