Determinação da ativação de monócitos e de biomarcadores celulares em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Abstract

Preeclampsia (PE) is a pregnancy-specific human syndrome characterized by a systemic inflammatory response, with higher intensity than the one observed in normal pregnancy. In this pathology, innate immune cells such as monocytes and granulocytes are activated endogenously and secrete high levels of inflammatory cytokines and free radicals. 1) to determine the activation state of monocytes by endogenous expression of TLR2 and TLR4 receptors as well as the nuclear transcription factor (NF-κB) activation in these cells in pregnant women with PE, distributed according to the gestational age of clinical manifestations (early or late-onset) of the disease; 2) to correlate TLR2 and TLR4 expression with TNF-α, IL-10 and IL-12 by monocytes stimulated with lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli and peptidoglycan (PGN) of Gram-positive bacteria in pregnant women with early-onset or late-onset PE; 3) to verify if the parameters studied may differentiate early-onset or late-onset PE. We studied 92 pregnant women, 32 normotensive and 60 women with PE, paired for gestational age. Preeclamptic pregnant women were classified according to onset of clinical manifestations in early-onset PE (<34 weeks gestation, n=30) and late-onset PE (≥ 34 weeks gestation, n=30). Monocytes from peripheral blood obtained from preeclamptic and normotensive pregnant women were incubated for 18h in the absence or presence of LPS or PGN. Expression of TLR2 and TLR4 receptors present on the surface of monocytes, was detected by flow cytometry, using specific monoclonal antibodies labeled with fluorochromes. To analyze NF-κB, monocytes were incubated with or without LPS or PGN for 30 min and the nuclear extract obtained was employed for NF-κB determination. Monocytes were further cultured in the presence or absence of LPS and PGN and the supernatant obtained after 18h cultivation was aspirated and used for TNF-α, IL-10, IL-12p40 and IL-12p70 determination by ...

A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gestação humana, caracterizada por uma resposta inflamatória sistêmica, de maior intensidade do que a observada na gestação normal. Nessa patologia, células do sistema imune inato como monócitos e granulócitos encontram-se ativadas endogenamente e secretam níveis elevados de radicais livres e citocinas inflamatórias. 1) Determinar o estado de ativação endógena de monócitos pela expressão de receptores TLR2 e TLR4, bem como a ativação do fator de transcrição nuclear NF-κB nessas células em gestantes portadoras de PE distribuídas quanto à idade gestacional de aparecimento das manifestações clínicas (precoce ou tardia) da doença; 2) Correlacionar a expressão de TLR2 e TLR4 com a produção de fator de necrose tumoral alfa (TNF-), interleucina-10 (IL-10) e IL-12 por monócitos estimulados com lipopolissacáride de Escherichia coli (LPS) e peptidoglicano (PGN) de bactéria Gram-positiva em gestantes com PE precoce ou tardia; 3) Verificar se os parâmetros estudados diferenciam PE precoce e tardia. Foram estudadas 92 gestantes, sendo 32 normotensas e 60 portadoras de PE, pareadas pela idade gestacional. As gestantes pré-eclâmpticas foram classificadas de acordo com o aparecimento das manifestações clínicas em PE precoce (<34 semanas de gestação, n=30) e PE tardia (≥34 semanas de gestação, n=30). Monócitos de sangue periférico obtidos de gestantes normotensas ou com PE foram cultivados por 18 h na ausência ou presença de LPS ou de PGN. A expressão de receptores TLR2 e TLR4, presentes na superfície de monócitos, foi detectada por citometria de fluxo, empregando-se anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos. Para análise da ativação do fator de transcrição nuclear NF-κB os monócitos foram incubados na presença ou ausência de LPS ou PGN por 30 min e o extrato nuclear obtido foi empregado para dosagem de NF-κB. Monócitos ...