Efeitos da terapia fotodinâmica na expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 em Candida albicans

Abstract

With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans

Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência