Desenvolvimento e validação de uma técnica quantitativa de análise de imagem para avaliação do teste do cometa corado pela prata

Abstract

The comet assay is a method of DNA damage analysis widely used to quantify oxidative damage, crosslinks of DNA, apoptosis and genotoxicity of chemicals substances as chemical, pharmaceuticals, agrochemicals products, among others. This technique is suitable to detect DNA strand breaks, alkali-labile sites and incomplete excision repair sites and is based on the migration of DNA fragments by microeletroforesis, DNA migrates for the anode forming a “tail”, and the formed image has the appearance of a comet. The slides can be stained with fluorescence or silver, having differences in the microscopy type used for the analysis and the possibility of storage of the slides, moreover, the first one is a stained-method with more difficulties of accomplishment. The image analysis can be performed by a visual way, however, there is a disadvantage as the subjectivity on the results, that can be minimized by an automated method of digital analysis. This process was studied in this report with the aim to perceive the validation of the digital analysis turning it a quantitative method with larger reproductibility, minimizing the variability and imprecision due to the subjective analysis. For this validation we selected 50 comets photographed in a standardized way and printed, afterwards, pictures were submitted to three experienced appraisers, who quantified them manually. Later, the images were processed by free software ImageJ 1.38x, printed and quantified manually by the same appraisers. The intraclass correlation was higher to comet measures after image processing. Following, an algorithm of automated digital analysis from the measures of the comet was developed; the values obtained were compared with those 12 estimated manually after the processing resulting high correlation among the measures. The use of image analysis systems increases ...(Complete abstract click electronic access below)

O teste do cometa é um método de análise de dano no DNA amplamente utilizado para quantificar danos oxidativos e crosslinks de DNA, apoptose e a genotoxicidade de substâncias químicas como produtos químicos, farmacêuticos, agroquímicos, entre outros. A técnica é sensível para detectar lesões em fita simples de DNA, lesões de sítios alcalinos lábeis e locais de reparos incompletos e se baseia na migração de fragmentos de DNA em microeletroforese, o DNA migra para o ânodo formando uma “cauda”, e a imagem formada tem a aparência de um cometa. As lâminas podem ser coradas com fluorescência ou ainda pela prata, tendo diferenças no tipo de microscópio utilizado para a análise e pela possibilidade de armazenamento das lâminas, e sendo a primeira um método de coloração com maiores dificuldades de realização. A análise das imagens pode ser realizada de maneira visual, porém há a desvantagem da subjetividade dos resultados, o que pode ser minimizado por um método automatizado de análise digital. Esse processo foi estudado neste trabalho com o objetivo de realizar a validação da análise digital tornando-o um método quantitativo com maior reprodutibilidade, minimizando a variabilidade e imprecisão decorrente da análise subjetiva. Para essa validação utilizamos 50 cometas fotografados de maneira padronizada e impressos, as imagens foram submetidas a três avaliadores experientes, os quais as quantificaram manualmente. Posteriormente, as imagens foram processadas pelo software gratuito ImageJ 1.38x, impressas e quantificadas manualmente pelos mesmos avaliadores. Houve melhor desempenho na concordância intraclasse das medidas avaliadas manualmente após o processamento digital das imagens Em seguida, foi desenvolvido um algoritmo de análise digital das medidas do cometa, os valores obtidos ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)