Expansão ex vivo de células uroteliais em scaffolds 3D

Abstract

Malformations and possible damages to the urogenital system can be originated in the embryonic period. Moreover, fire guns, knives and accidents, where there is the disruption of the urethra, also cause these lesions. The objective was to analyze the contribution of tissue engineering in the construction of neo-urethra, developed by bioengineering. We performed an urothelial ex vivo expansion of cells in 3D scaffolds (platelet gel matrix and acellular porcine aorta) to assess the contribution of this technique in the construction of a neo-urethra. Mechanical dissociation was made of the inner wall of 10 North Folk rabbit’s bladder, weighing 2.5 to 3.0 kg. After dissociation the cell content was centrifuged and obtained a pellet of urothelial cells. The pellet was ressuspended in culture medium DMEM F12 and cells were maintained in culture for 15 days. Immunohistochemical analysis characterized the urothelial culture. The cells were then implanted in the scaffold - platelet gel. In a second experiment using aortic porcine acellular matrix were implanted urothelial cells alone and urothelial cells on platelet gel, on the inner wall of the scaffold - aorta, with space for setting bordered by a urethral probe. The complex probe - cells - aorta and probe - cells in platelet gel - aorta, were sealed with suture material and culture were maintained in a humidified 37ºC incubator with 5% CO2 in air for 12 days to subsequent histological analysis of urothelium cell adhesion to the scaffolds. By observation under an optical microscope, we could see the growth of cells in the scaffold platelet gel, from a monolayer in to a three-dimensional structure. In the acellular porcine aortic matrix containing the platelet gel, we could observe a few quantity of urothelial cells adhered. However with the acellular porcine aortic matrix in which was implanted only the urothelial cells, we have obtained adhesion to the wall

Malformações e possíveis lesões no sistema urogenital podem ser advindas do período embrionário. Essas lesões também são causadas por armas de fogo, armas brancas e em acidentes; onde ocorre o rompimento da uretra. Diante do exposto, o objetivo foi analisar a contribuição da engenharia de tecidos na construção de neo-uretra, desenvolvida por bioengenharia. Foi realizada a expansão ex vivo de células uroteliais em scaffolds 3D (gel de plaquetas e matriz acelular de aorta suína) para avaliar a contribuição desta técnica na construção da neo-uretra. Manualmente, foi feita a dissociação mecânica da parede interna da bexiga de 10 coelhos da raça North Folk, com peso entre 2,5 a 3,0Kg. Após a dissociação foi centrifugado o conteúdo celular e obtido um pellet de células uroteliais. O pellet foi ressuspendido em meio de cultura DMEM F12 e as células foram mantidas em cultura por 15 dias. Mediante análise imunohistoquímica foi caracterizada a cultura urotelial. As células foram então implantadas em scaffold - gel de plaquetas. Em contrapartida, em um segundo experimento, utilizando matriz acelular de aorta suína, foram implantadas células uroteliais, e células uroteliais em gel de plaquetas, na parede interna do scaffold - aorta, com espaço de fixação delimitado por uma sonda uretral. Os complexos sonda - células - aorta e sonda - células em gel de plaquetas - aorta, foram selados com auxílio de fio cirúrgico e mantidos em meio de cultura e estufa sob condições adequadas por 12 dias, para posterior análise histológica de adesão das células do urotélio aos scaffolds. Mediante observação em microscópio óptico, foi observado o crescimento das células no scaffold gel de plaquetas, passando de monocamada à estrutura tridimensional. No experimento contendo a matriz acelular de aorta suína com gel de plaquetas, observou-se uma pequena...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)