Tumor mamário canino: estudo in vitro, imunomarcação e ação da doxorrubicina

Abstract

Canine mammary tumors represent a high casuistry in veterinary oncology and few studies with cell culture are being employed, mainly with drug application. The purpose was to establish and standardize the cell culture of canine mammary tumors for in vitro efficacy of doxorubicin and to correlate the immunostaining of vimentin, cytokeratin, p53 and HER-2, in paraffin sections of original tumor and the cell cultures derivated. Benign mixed tumor, complex carcinoma, simple carcinoma and espinocelular carcinoma were cultivated from explants and the cells originated were incubated with doxorubicin in different concentrations (control-0.25-0.50-0.75-1.0-2.0μM). The percentual of viable cells were determined by the Trypan blue dye exclusion test and for immunoexpression, the immunohistochemistry was performed for the primary tumor and immunofluorescence, for the cells. A total of 39 tumor samples were collected and, 40% were cultivated up to fifth passages. A different imunnoexpression was observed between methodologies with higher expression at vimentin, p53 and HER-2 groups. It was observed that doxorubicin presented an elevated efficacy in canine mammary cell culture but without difference among the histological groups and each sample presented an individual responsiveness for the same treatment. So, it can be concluded that it was possible to realize a primary cell culture with a simple culture medium formulation; gene expression profiles in tumor tissue and cell culture derived from those tumors are better designated than immunoexpression tests and higher the concentration of doxorubicin, lower the cell viability

A neoplasia mamária canina representa uma das maiores casuísticas na oncologia veterinária e o emprego de seus respectivos cultivos celulares são importantes, principalmente, na área terapêutica. Assim, o objetivo do presente estudo foi padronizar e estabelecer cultivos celulares de tumores mamários caninos para testes in vitro com doxorrubicina e, correlacionar imunomarcações com vimentina, citoqueratina, p53 e HER-2 no tumor original e nas células do seu cultivo. Tumor misto benigno e os carcinomas complexo, simples e espinocelular foram cultivados a partir de explantes com posterior exposição das células à doxorrubicina (controle-0,25-0,50-0,75-1,0-2,0μM). A viabilidade celular foi mensurada pelo azul de Tripan e os testes com imunomarcadores para cada espécie tumoral foram por imuno-histoquímica e, no cultivo, pela imunofluorescência. Do total de 39 amostras, 40% foram cultivadas até a quinta ou mais passagens. As imunomarcações não foram expressas de forma similar entre as técnicas, com diferença significativa na frequência de vimentina, p53 e HER-2, de forma aumentada nos cultivos. A doxorrubicina apresentou alta eficácia nas células tumorais, mas sem diferença entre os tipos histológicos, porém cada cultivo comportou-se distintamente quando analisado em isolado. Conclui-se que é possível cultivar primariamente diferentes tumores mamários caninos utilizando-se meio de cultivo básico; os testes de expressão gênicas são mais indicados para análises comparativas entre tumor e seu respectivo cultivo e, quanto maior a concentração do quimioterápico, menor a viabilidade celular