Bioestimulação de célula-tronco mesenquimal de rato sob ação da luz contínua e pulsátil de 630 nm utilizando LED

Abstract

Regenerative medicine (RM) has emerged of different sciences boost, including biology of the stem cell. The mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from adipose tissue have occupied more space in MR. They are characterized by differentiation, self-renewal and the ability to generate at least three different cell lines, being involved in the repair of damaged tissue, however they are dose-dependent requiring expansion by cell culture method. The applicability of LED as biostimulator agent has been proposed. The aim of this study was to evaluate the effect of continuous and pulsed light, 630nm, comparing this action in cells obtained by the methods of mechanical and enzymatic dissociation. Mouse fat blocks were removed from rats with an average age of 3 months. The concentration of cells obtained LMN / g tissue 1 x 105 and 3.34 x 105 MD and ED, respectively. The phenotypic profile using markers as CD90 / CD44 / CD71 / CD31 / CD11b / CD45 showed that ED removes a significant percentage of the surface antigens of MSCs. The curve of the confluence at 80% between passages showed that MSCs obtained by MD was beneficiated by the action LED and proliferating faster. Cytokines TNF, IFN-ɣ, IL-4 and IL-10 were determined by flow cytometry. Most of the samples showed cytokine secretion was obtained by MD method. Control samples, not-irradiated also showed secretion of cytokines, showing the action of the additive of the culture medium as biostimulator of paracrine effects. The micronucleus and comet assays to the genotoxicity analysis show that pulsed light of 1J / cm2 determine the appearance of micronuclei, while DNA damage determined by the comet assay decreases by the LED action

A medicina regenerativa emergiu do impulso biotecnológico com uso da célula-tronco (CT), caracterizada por indiferenciação, autorrenovação e capacidade de gerar vários tipos celulares. A célula-tronco mesenquimal (CTM) pode ser isolada de várias fontes biológicas, sendo o tecido adiposo uma promissora fonte. São candidatas para aplicação em terapia celular por vários motivos e capazes de se diferenciar e produzir muitos tipos celulares para reparação do tecido danificado, no entanto são dose dependente necessitando de expansão pelo método de cultura celular. A aplicabilidade do LED como agente bioestimulador tem sido proposto. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação da luz contínua e pulsátil, 630nm, comparando esta ação sob células obtidas pelos métodos de dissociação mecânica e enzimática. Foram retirados blocos de gordura de rato wistar com idade média de 3 meses. A concentração de células LMN obtidas/g de tecido 1 x 105 e 3,34 x 105 para DM e DE, respectivamente. O perfil fenotípico utilizando CD90/CD44/CD71/CD31/CD11b/CD45 evidenciou que a DE remove um percentual significativo de antígenos das superfícies das CTMs. Quanto à curva de confluência à 80% entre as passagens, mostrou que as CTMs obtidas por DM sofrem melhor a ação do LED, proliferando mais rapidamente. Foram determinadas citocinas TNF, IFN-ɣ, IL-4 e IL-10. A maioria das amostras que apresentam secreção de citocinas foram obtidas pelo método de DM. Amostras controle, não irradiadas também apresentaram secreção de citocinas, mostrando a ação dos aditivos do meio de cultura como bioestimulador dos efeitos parácrinos. Os testes de micronúcleo e cometa para análise de genotoxicidade evidenciam que a luz pulsátil de 1J/cm2 determinam o aparecimento de micronúcleos, enquanto que o dano de DNA determinado pelo cometa, diminui pela ação do LED