O sistema folicular: desenvolvimento de um protocolo para maturação oocitária in vitro que retarda a maturação nuclear e prolonga a comunicação entre o oócito e células do cumulus

Abstract

A comunicação entre o oócito e células somáticas adjacentes é essencial para a diferenciação do complexo cumulus-oócito (COC). Essa comunicação é proporcionada por processos citoplasmáticos trans-zonais (TZP) que penetram através da zona pelúcida e atingem a membrana do oócito, onde junções do tipo gap permitem transporte bidirecional de sinais elétricos e moléculas reguladoras. A maturação oócitária in vivo é controlada por gonadotrofinas e peptídeos intra-ovarianos e desencadeada pelo pico de LH. Este, induz a expressão dos fatores EGF-like que desencadeiam uma série de fatores que levam a fosforilação das conexinas, e com isso o fechamento de junções gap e consequentemente perda dos efeitos inibitórios do monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) e monofosfato cíclico de guanosina (GMPc), proporcionando assim a retomada da meiose. O objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos da inclusão de uma fase de pré maturação seguida da maturação in vitro sobre a progressão da meiose, funcionalidade das junções gap e produção embrionária. A pré maturação foi empregada utilizando componentes de ordem fisiológica encontradas no ambiente folicular, e esta, foi capaz de retardar a quebra da vesícula germinativa (VGBD), enquanto favoreceu a comunicação entre oócito e células do cumulus, o que acreditamos ser beneficial para o desenvolvimento oocitário in vitro. No entanto, quando seguida da maturação in vitro também utilizando componentes fisiológicos, foi capaz de produzir blastocistos, porém não foi eficiente em melhorar as taxas e o desenvolvimento embrionário.

The maturation of the cumulus oocyte complex (COC) is triggered by the ovulatory LH surge in vivo, and precociously induced when the COC is removed from the follicle. Natriuretic peptide type C (NPPC) plays a central role in maintaining meiotic arrest in vivo and delays GVBD while increasing oocytecumulus communication during IVM in cattle. In this study we first tested the hypothesis that follicular steroids (estradiol, progesterone and androstenedione) combined with FSH at approximately physiological levels cooperate with NPPC to delay GVBD and to maintain oocyte-cumulus communication. Then, we assessed the effects of follicular steroids, NPPC and the combination of both in a pre-IVM culture followed by IVM induced with AREG on embryo production. Follicular steroids combined with NPPC was most effective in increasing the proportion of GV oocytes in Bos indicus, although follicular steroids did not significantly enhance the effect of NPPC in Bos Taurus. . Moreover, follicular steroids enhanced the ability of NPPC to increase the proportion of COCs with opened GAP junctions. The addition of follicular steroids and/or NPPC to a pre- IVM culture did not alter blastocyst production after IVF. In conclusion, the combination of follicular steroids with NPPC can alter GVBD dynamics and cell communication favorably to oocyte developmental competence, but when used in a pre-IVM culture followed by induction of COC maturation with AREG and IVF, it did not increase embryo production.