Avaliação do estresse oxidativo no plasma seminal de cães férteis e subférteis após suplementação oral com vitamina C e E

Abstract

Sperm cells are highly susceptible to oxidative stress due to a high concentration of fatty acid in the composition of their membranes. Oxidative stress occurs due to an imbalance between the concentrations of antioxidants and oxidants, which can lead to the loss of sperm fertilizing ability. The aim of this study was to evaluate, in seminal plasma, the rates of lipid peroxidation and concentration of antioxidants: Superoxide Dismutase (SOD), catalase, vitamins C and E, from fertile and subfertile dogs after an oral supplementation of vitamin C and E for 60 days. For that, it was used 13 dogs of different breeds and ages that were fed with commercial food (Max Adulto - Royal Canin) for four months. Over the past 60 days, animals received a diet added to oral supplementation of 500 mg vitamin C and E. Semen was collected by penis digital manipulation in three times before (M1), 30 (M2) and 60 days (M3) of supplementation. Seminal plasma was obtained after centrifugation (18000g) of the ejaculate and stored in Eppendorff tubes in a freezer at -20 º C. It was measured in seminal plasma the index of lipid peroxidation, by analysis of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), and the concentrations of SOD, catalase, vitamin C and E. Analysis of lipid peroxidation, concentrations of SOD, catalase and vitamin C were performed using a spectrophotometer at different wavelengths (532, 530, 230 and 520, respectively) and for the evaluation of SOD it was used a commercial kit (Frutosamina - Labtest ®). The concentration of vitamin E was performed using a high-performance liquid chromatography (HPLC). The results showed significant differences between groups of fertile and infertile dogs only at M1 (before oral supplementation). There was no difference between groups in other moments. Regarding the concentration of antioxidants, there was no significant difference between groups and between moments. Based on the exposed, the oral supplementation with vitamin C and E in dosages of 500 mg / day for 60 days did not interfere on the rates of lipid peroxidation (TBARS) and antioxidant concentrations.

Los espermatozoides son muy sensibles al estrés oxidativo debido a la gran concentración de ácidos grasos presentes en sus membranas. El estrés oxidativo se produce debido al desequilibrio entre las concentraciones de las sustancias antioxidantes y oxidantes, lo que puede generar pérdida en la capacidad fértil de los espermatozoides. El objetivo de este estudio fue evaluar, en el plasma seminal, las tasas de peroxidación de lípidos y la concentración de antioxidantes: superóxido dismutasa (SOD), catalasa, vitaminas C y E, en perros fertiles y subfértiles después de la suplementación oral de vitamina C y E durante 60 días. Para este, hemos utilizado 13 perros de diferentes razas y edades que fueron alimentados con una dieta comercial (Max Adultos - Royal Canin) durante cuatro meses. Durante los últimos 60 días, los animales recibieron la dieta comercial en conjunto con una suplementación oral de 500 mg de vitamina C y E durante 60 días. El semen fue colectado por manipulación digital del pene en tres veces antes (M1), 30 (M2) y 60 días (M3) de la suplementación. El plasma seminal se obtuvo a partir de la centrifugación (18000g) del eyaculado y se almacenó en tubos Eppendorff en un congelador a - 20ºC. En el plasma se midieron la peroxidación lipídica mediante análisis de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS), y las concentraciones de SOD, catalasa, vitamina C y E. Los análisis de peroxidación lipidica, las concentraciones de SOD, catalasa y la vitamina C se realizaron en un espectrofotómetro en diferentes longitudes de onda (532, 530, 230 y 520, respectivamente) y para la evaluación de la SOD utilizó un kit comercial (fructosamina - Labtest ®). La determinación de vitamina E se realizó mediante una cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Los resultados mostraron diferencias significativas entre los grupos de perros fértiles e infértiles sólo en M1 (antes de la suplementación oral). No hubo diferencias entre los grupos en otros momentos. En relación a la concentración de antioxidantes, no hubo diferencias significativas entre los grupos y entre los tiempos. Con base en lo anterior la suplementación oral con vitamina C y E en dosis de 500 mg / día durante 60 días no afectó los índices de peroxidación lipídica (TBARS) ní las concentraciones de antioxidantes.

Os espermatozóides são células altamente susceptíveis ao estresse oxidativo devido a grande concentração de ácidos graxos na composição de suas membranas. O estresse oxidativo ocorre devido a um desequilíbrio entre as concentrações de substâncias antioxidantes e oxidantes, o que pode levar a perda da capacidade fertilizante do espermatozóide. O objetivo deste trabalho foi avaliar, no plasma seminal, as taxas de peroxidação lipídica e a concentração das substâncias antioxidantes: Superóxido Dismutase (SOD), catalase, vitaminas C e E de cães férteis e subférteis após uma suplementação oral de vitamina C e E por 60 dias. Foram utilizados 13 cães de diferentes raças e idades que receberam ração comercial (Max Adulto – Royal Canin) por quatro meses. Nos últimos 60 dias, os animais receberam uma suplementação oral de 500mg de vitamina C e E, a qual foi adicionada na ração. O sêmen foi coletado por manipulação digital do pênis em três momentos, antes (M1), após 30 (M2) e 60 dias (M3) de suplementação. O plasma seminal foi obtido após centrifugação (18000g) do ejaculado e armazenado em tubos tipo eppendorf em congelador a -20ºC. Foram mensurados no plasma seminal o índice de peroxidação lipídica, através da análise das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), e as concentrações de SOD, catalase, vitamina C e E. A análise de peroxidação lipídica, das concentrações de SOD, catalase e vitamina C foram realizadas em espectrofotômetro em diferentes comprimentos de onda (532, 530, 230 e 520, respectivamente) sendo que para a avaliação da SOD utilizou-se um kit comercial (Frutosamina – Labtest®). A concentração da vitamina E foi realizada em aparelho de cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Os resultados mostraram diferença significativa entre os grupos de cães férteis e subférteis apenas no M1 (antes da suplementação oral). Não foi verificado diferença entre os grupos nos demais momentos. Em relação a concentração dos antioxidantes, não foi observado diferença significativa entre os grupos e entre os momentos. Baseado no exposto a suplementação oral com vitamina C e E nas dosagens de 500mg/dia por 60 dias não interferiu nas taxas de peroxidação lipídica (TBARS) e nas concentrações dos antioxidantes.