Variações metodológicas na criopreservação de sêmen sexado de bovinos

Abstract

The objective of this study was to evaluate the effects of 3 different cooling protocols for freezing bovine sexed semen by flow cytometry. It was used two ejaculates of 10 bulls, after collection of semen that was processed for separation of X and Y sperm. After separation by the cytometer, the samples were divided into 3 groups: control (C), the sperm were placed in medium without glycerol and stored at 5°C/90 minutes, group 1 (G1), the sperm were placed in medium without glycerol and stored at 18ºC/90 minutes, group 2 (G2), the sperm were placed in medium with glycerol and stored at 5°C/90 minutes Subsequently the samples were stored in straws and subjected to freezing. After thawing, samples were evaluated following sperm parameters: sperm analysis of the kinetics through a computerized system (CASA), the sperm membrane integrity and mitochondrial potential by epifluorescence microscopy. For statistical analysis it was used ANOVA and Tukey's test where appropriate, with significance level P < 0.05. For the kinetic analysis of sperm was found that the values of linear velocity by G1 (82.3μm/s) were lower as compared to G2 (90.5μm/s) and C (89.7μm/s) and for curvilinear velocity, group C (206.6μm/s) showed values higher than G1 (183.0μm/s) and G2 (194.2μm/s) similar to both. For plasma membrane integrity G2 (34.7%) had significantly lower than C (39.4%) and G1 (41.6%), however mitochondrial function values were higher in group C (62, 6%) compared to G1 (47.5%); and, G2 (51.1%) was similar to both. Based on the results obtained can be conclude that 3 protocols adopted for cooling the freezing of semen sexed cattle showed few variation. Thus further studies are needed to improve the procedure of cryopreservation of bovine sexed semen.

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de 3 protocolos diferentes de refrigeración para congelar semen sexado bovino mediante citometria de flujo. Se utilizaron dos eyaculados de 10 toros, después de la colecta del semen se procesó para la separación de espermatozoides X e Y. Después de la separación por el citómetro, las muestras se dividieron en 3 grupos: control (C), los espermatozoides fueron colocados en medio sin glicerol y almacenados en 5°C/90 minutos, grupo 1 (G1), los espermatozoides fueron colocados en un medio sin glicerol y almacenados en 18°C/90 minutos, grupo 2 (G2), los espermatozoides fueron depositados en un medio con glicerol y almacenados a 5ºC/90 minutos. Posteriormente las muestras se almacenaron en pajuelas y sometidos a la congelación. Después de la descongelación se evaluaron los siguientes parámetros del esperma: análisis de esperma de la cinética a través de un sistema computarizado (CASA), integridad de las membranas espermáticas y el potencial mitocondrial por el microscopio de epifluorescência. Para el análisis estadístico se utilizó ANOVA y prueba de Tukey, cuando necesario, con nivel de significación p < 0,05. Para el análisis cinético de los espermatozoides se encontró que los valores de la velocidad lineal de G1 (82,3μm/s) fueron inferiores en comparación con el G2 (90,5μm/s) y C (89,7μm/s) y para la velocidad curvilínea, grupo C (206,6μm/s) presentó valores superiores a G1 (183,0μm/s) y G2 (194,2μm/s) similar a los dos. En cuanto a la integridad de la membrana plasmática el G2 (34,7%) presentó valores significativamente más bajo que el C (39,4%) y G1 (41,6%), sin embargo los valores de la función mitocondrial fueron mejores en el Grupo C (62, 6%) en comparación con el G1 (47,5%) y G2 (51,1%) similar a los dos. En cuanto a los resultados obtenidos se puede concluir que los tres protocolos adoptados para la refrigeración de la congelación de semen sexado bovino mostraron poca variación. Así, se necesitan más estudios para mejorar el procedimiento de la criopreservación de semen sexado de la especie bovina.

O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos de três diferentes protocolos de refrigeração para a congelação de sêmen sexado bovino, pela citometria de fluxo. Foram utilizados dois ejaculados de 10 touros, após a colheita do sêmen este foi processado para a separação dos espermatozóides X e Y. Após a separação pelo citômetro, as amostras foram divididas em três grupos: controle (C), os espermatozóides eram depositados em meio sem glicerol e acondicionados a 5ºC/90 minutos; grupo 1 (G1), os espermatozóides eram depositados em meio sem glicerol e acondicionados a 18ºC/90 minutos; grupo 2 (G2), os espermatozóides eram depositados em meio com glicerol e acondicionados a 5ºC/90 minutos. Posteriormente as amostras eram envasadas em palhetas e submetidas à congelação. Após a descongelação foram avaliados os seguintes parâmetros espermáticos: análise da cinética espermática pelo sistema computadorizado (CASA), integridade das membranas espermáticas e potencial mitocondrial pela microscopia de epifluorescência. Para análise estatística dos dados utilizou-se ANOVA e teste Tukey quando necessário, com nível de significância p < 0,05. Em relação às análises da cinética espermática foi verificado que os valores obtidos de velocidade linear pelo grupo G1 (82,3µm/s) foram inferiores em relação ao G2 (90,5µm/s) e C (89,7µm/s); e para velocidade curvilinear, o grupo C (206,6µm/s) apresentou valores superiores a G1 (183,0µm/s), sendo G2 (194,2µm/s) similar a ambos. Já para integridade de membrana plasmática o grupo G2 (34,7%) apresentou valores significativamente inferiores ao C (39,4%) e G1 (41,6%), entretanto a função mitocondrial apresentou valores superiores para o grupo C (62,6%) em relação ao G1 (47,5%); sendo o G2 (51,1%) similar a ambos. Com relação aos resultados obtidos pode-se concluir que os três protocolos de refrigeração adotados para a congelação de sêmen sexado bovino apresentaram poucas variações. Assim novos estudos são necessários para aprimorar o procedimento de criopreservação de sêmen sexado bovino.