Detecção in vitro da hepatite C (VHC) em plaquetas provenientes de indivíduoas não infectados expostas ao vírus

Abstract

A hepatite C é uma doença crônica resultante da infecção por um vírus, o VHC, que infecta hepatócitos pela interação com um receptor de superfície celular, o CD81. No entanto, algumas proteínas de adesão já foram associadas com a entrada do vírus em hepatócitos e, têm sido relacionadas com a entrada de outros vírus em suas células alvo. O RNA do VHC já foi encontrado em plaquetas, as quais não expressam CD81, embora esta proteína esteja presente em megacariócitos. As plaquetas expressam determinantes antigênicos polimórficos em sua superfície denominados HPA. Alguns HPA residem em integrinas. Já foi demonstrada uma associação entre HPA-5b e a infecção pelo VHC. O objetivo deste estudo foi determinar a presença de RNA do VHC em plaquetas coletadas de sangue periférico de 50 doadores de sangue com RT-PCR negativa para o vírus. Estas plaquetas foram infectadas com VHC in vitro e incubadas a 37ºC por 8-48 horas. RNA extraído foi utilizado para detectar a presença do vírus por RT-PCR e, avaliar as diferenças quantitativas na carga viral de acordo com o perfil HPA por qRT-PCR. Todas as plaquetas foram positivas para o RNA do VHC após a incubação com o vírus, o que demonstra que o vírus interage com as plaquetas in vitro. Foi observado um desvio no equilíbrio de Hardy-Weinberg no sistema HPA-1. A freqüência do alelo HPA-1b foi significativamente inferior (p <0,05) em plaquetas com carga viral acima de 18,4 UI/mL, sugerindo que o alelo b pode estar relacionado com menores níveis de carga viral

Hepatitis C is a chronic disease caused by a virus, the HCV, which usually infects hepatic cells by interaction with a cell surface receptor, a tetraspanin (CD81). However, adhesion proteins already were associated with the virus entry in hepatocytes and have been related with the entry of the others virus in their host cell, too. The HCV RNA already found in platelet but it doesn’t express CD81, although this protein is present in megakaryocytes. Platelets express polymorphic antigenic determinants on their surface, named HPA. Some HPA resides in transmembrane glycoprotein of integrin family. Preview study demonstrated an association between HPA -5b and HCV infection. The goal of this study was to determine the presence of HCV RNA in platelets collected from peripheral blood from 50 blood donors with RT-PCR negative for the virus. These platelets were infected in vitro with HCV and incubated at 37oC for 8-48 hours. RNA was then extracted and used for RTPCR and qRT-PCR to detect the presence of the virus and evaluate quantitative differences in viral load according with the HPA profile. All platelets were positive for HCV RNA after incubation with the virus, demonstrating that the virus interacts with the platelets in vitro. There was deviation from Hardy–Weinberg equilibrium in the HPA-1 system. The allele frequency of HPA-1b was found to be significantly lower (p<0.05) in platelet with viral load upper 18.4 UI/mL, suggesting that allele b could be related with lower viral load levels