Uso de antioxidantes no meio diluente tris para refrigeração e congelação de células espermáticas provenientes de epidídimo de cães submetidos à orquiectomia eletiva

Abstract

O objetivo foi testar se a suplementação do meio diluente com dois antioxidantes (N-acetilcisteína e/ou vitamina E), em diferentes concentrações, melhorou a qualidade da preservação das células espermáticas provenientes de epidídimo de cães, nos processos de refrigeração e congelação. Utilizaram-se 15 unidades experimentais (UE), cada uma, constituída pelo recuperado espermático de cinco cães hígidos, submetidos à orquiectomia eletiva; as quais foram divididas em três grupos experimentais (GI, GII, GIII), constituídos por cinco UE cada. Adicionou-se antioxidantes nas concentrações de 5,0; 2,5 e 0,5mMol, respectivamente. Cada grupo foi dividido em três alíquotas, uma avaliada a fresco, outra refrigerada por 48 horas e a terceira congelada. Ato continuo, cada UE foi dividida em quatro alíquotas de igual volume e estas centrifugadas; o concentrado de espermatozoides foi ressuspendido em meio diluente TRIS, acrescido de vitamina E e/ou N-acetil-cisteína. Realizou-se a avaliação dos espermatozoides, quanto à motilidade, vigor, teste vital e morfologia espermática. A integridade de membrana foi avaliada por meio do teste hiposmótico e coloração por sondas fluorescentes, e a atividade mitocondrial pela atividade citoquímica (DAB). Os dados obtidos foram submetidos à análise não paramétrica pelo teste de Kruskal-Wallis e Friedman, e os paramétricos pelo Tukey (p<0,05). Observou-se significância entre os grupos GI, GII e GIII, sendo que o GIII apresentou melhores resultados (p<0,05). Não foi observada diferença entre os tratamentos do GII (p>0,05), em relação aos do GI, ressaltou-se a suplementação da NAC isolada ou associada à vitamina E possuindo efeito deletério na preservação das células espermáticas (p<0,05), e aos do GIII, a suplementação do meio diluente com antioxidantes...

The aim of the present study was to evaluate whether the supplementation of the extender media with two different antioxidants, using them separately or associated and in different concentrations, improved or not the quality of sperm cells after cooling and freezing. Fifteen experimental units (EU), each one consisted by epidydimal sperm recovered from five healthy dogs (total of 75 animals) that underwent to elective orchiectomy were assessed. The EU were equally divided into three experimental groups. Group I (GI) and II (GII), III (GIII) had the addition of 5; 2.5; or 0.5 of antioxidants. Each group was divided into three aliquots, the first one was evaluated at the moment of the collection, the second aliquot was chilled for 48 h and the third was frozen. Subsequently, each EU was divided into four aliquots of equal volume and immediately centrifuged, the supernatant was discarded and the concentrated sperm resuspended in TRIS extender supplemented with Vitamin E and/or N-acetyl-cysteine. Sperm total and progressive motility, and vital test were performed.. Additionally, membrane integrity was assessed using the hyposmotic swelling test and fluorescent staining. Nevertheless, mitochondrial activity was performed by cytochemical activity test (DAB). The data were statistically analyzed using nonparametric Kruskal-Wallis and Friedman and parametric Tukey (p <0.05). Except for 5 mMol of NAC or NAC + Vitamin E that were harmful for the sperm cells, there was no significance among the experimental groups. However, when comparing the different antioxidant concentrations of the same chemical significance variation was noticed and 0.5 mMol of NAC and/or Vit E promoted more benefits to the spermatic cells when compared to the other concentrations, and when added to the extender, 0,5 mMol... (Complete abstract click electronic access below)