Ocorrência e caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em cordeiros na Região de Araçatuba-SP-Brasil: avaliação da transferência da imunidade passiva

Abstract

Foram coletadas 460 amostras de fezes de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar a ocorrência de Cryptosporidium na região de Araçatuba, assim como as espécies envolvidas nesta parasitose. Realizou-se análise microscópica pela técnica de coloração negativa com verde malaquita em todas as amostras de fezes. Para a identificação molecular de Cryptosporidium, nas amostras positivas à microscopia, utilizou-se a reação de nested PCR, com amplificação de fragmentos da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico ou do gene da actina. Encontraram-se 6,73% dos animais eliminando oocistos de Cryptosporidium nas fezes. A espécie e genótipo envolvidos foram: Cryptosporidium parvum e genótipo cervídeo que representam potencial zoonótico e Cryptosporidium parvum tipo B. Foram coletadas também 191 amostras de sangue de cordeiros com até 30 dias de vida com o objetivo de determinar as concentrações séricas de imunoglobulina G, PT, γ globulina, GGT e FA, assim como determinar a associação entre estas variáveis. Foi avaliada se a atividade sérica das enzimas GGT e FA pode ser utilizada indiretamente como indicadora de transferência de imunidade passiva. Para tanto, foram realizados os testes de imunodifusão radial, espectrofotometria e eletroforese respectivamente. Para os valores de GGT e FA, foram utilizados kits comerciais. Houve correlação estatística significativa entre a FA e GGT; fato também observado com relação a PT, a IgG e a GGT. A γ globulina mostrou-se correlacionada com GGT, IgG e PT. A atividade de FA demonstrou-se ineficaz para uso como indicadora de transferência de imunidade passiva.

A total of 460 fecal samples were collected from lambs during the first 30 days of life with the aim to determine the occurrence of Cryptosporidium in Araçatuba region, as well as to identify species involved in this parasitism. Microscopic analysis of feces was carried out using malachite green negative stain. Cryptosporidium positive samples were subjective to a nested PCR, with amplification of fragments of the subunity 18S of the gene of the ribossomic RNA or the gene of the actin. In this study 6.73% of animals were eliminating oocists of Cryptosporidium in their feces. The involved species and genotype were: Cryptosporidium parvum and cervide genotype, which represent a zoonotic potential and Cryptosporidium parvum type B. Blood samples (191) were collected from lambs that were up to 30 days old to determine the serum concentrations of immunoglobulin G, TP, γ globulin, GGT and ALP, as well as to determine the association between these variables. This was done in order to explore the possibility of using changes in activities of GGT e ALP as indirect indicators of immune passive transfer in lambs The following tests were perfomed: radial immunodiffusion, spectrophotometry and electrophoresis respectively. GGT and ALP values were determinate using commercial kits. There was a statistically significant correlation between ALP and GGT. The same correlation was observed from TP, IgG and GGT. A positive γ globulin correlation was found between GGT, IgG and TP. ALP activity cannot be used as an indicator of immune passive transfer.