Detecção e caracterização molecular de Chlamydophila psittaci e Chlamydophila abortus em aves assintomáticas

Abstract

Chlamydophila psittaci é uma bactéria que causa doença respiratória ou sistêmica em aves e em seres humanos. Há ainda, alguns relatos de infecção em aves por Chlamydophila abortus, que é um agente etiológico de problemas reprodutivos em mamíferos. Em vista do risco de transmissão para humanos a partir de aves assintomáticas o objetivo deste estudo foi detectar a presença de C. psittaci e C. abortus em amostras de fezes ou suabes cloacais de aves assintomáticas. Foram colhidas 403 amostras fecais ou suabes cloacais, provenientes de aves domésticas, selvagens ou exóticas, mantidas em cativeiro ou oriundas de apreensão. As amostras foram submetidas à PCR em tempo real para C. psittaci e C. abortus, para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 16S do rRNA, utilizando o SsoFast™ EvaGreen® Supermix (Bio-Rad) e análise da curva de dissociação. Para determinação do genótipo de C. psittaci, foi utilizada a hemi- nested PCR específica para o gene OMP-A, realizada nas amostras positivas pela PCR em tempo real, seguida de sequenciamento dos fragmentos amplificados. A PCR em tempo real revelou positividade em 17 (4,21%) amostras. A hemi-nested foi positiva em 2 amostras positivas pela PCR em tempo real. O genótipo A de C. psittaci foi identificado pelo sequenciamento de uma amostra amplificada pela hemi-nested PCR

Chlamydophila psittaci is a bacterium that causes respiratory or systemic disease in birds and humans. In birds there is also some reports of infection by Chlamydophila abortus that is responsible for abortions in mammals. Owing to the risk of transmission of Chlamydophila from asymptomatic birds to humans, the objective of this study was to detect the presence of C. psittaci and C. abortus in asymptomatic birds. Four hundred and three fecal samples or cloacal swabes were collected from domestic, wild or exotic birds kept in captivity or from apprehension. The 403 samples were examined by real time PCR specific for the 16S subunit of rRNA gene using SsoFastEvaGreen®Supermix™(Bio-Rad) and melting curve analysis. Hemi- nested PCR specific for the OMP-A gene, accomplished in real-time PCR positive samples, followed by sequencing of the amplified fragments were used to determine the genotype of C. psittaci. Real-time PCR was positive in 17 (4.21%) samples. Hemi-nested PCR revealed positivity in two samples previously positive by real-time PCR. Sequencing of the fragment amplified by hemi-nested PCR allowed for the identification of genotype A of C. psittaci in one sample