Avaliação da PCR em tempo real para detecção de Cryptosporidium parvum em amostras fecais de bezerros: Camila Guariz Homem. -

Abstract

A infecção por Cryptosporidium parvum em bovinos se manifesta como enfermidade subclínica ou com presença de morbidade e mortalidade, particularmente quando há associação com outros agentes infecciosos. Cryptosporidium parvum apresenta ainda grande importância em saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros e sua comparação com a reação em cadeia da polimerase (nested PCR), rotineiramente utilizada para diagnóstico de Cryptosporidium spp.. Duzentas e nove amostras fecais de bezerros entre um dia e seis meses de idade foram examinadas pela qPCR para amplificação de fragmentos do gene da actina e pela nested PCR para o gene da subunidade 18S do rRNA. A qPCR apresentou positividade para C. parvum em 73,21% (153/209) das amostras, enquanto a nested PCR apresentou amplificação positiva para Cryptosporidium spp. em 56,5% (118/209) das amostras. A sensibilidade analítica da qPCR foi de aproximadamente um oocisto de C. parvum. Não se observou amplificação inespecífica de DNA Cryptosporidium bovis, Cryptosporidium andersoni, Cryptosporidium ryanae, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium galli, Cryptosporidium baileyi e Cryptosporidium genótipo II de aves. Desta forma, conclui-se que a qPCR para o gene da actina é uma técnica sensível e específica para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros

The infection with Cryptosporidium parvum in cattle results in subclinical disease or in the presence of morbidity and mortality, particularly when associated with other infectious agents. This species is also an important public health problem. The aim of this research was to develop a real time polymerase chain reaction (qPCR) for detection of C. parvum DNA in fecal samples of calves, in comparison to a nested PCR routinely used for Cryptosporidium spp. diagnosis. Two hundred and nine fecal samples from calves aged between one day and six weeks were screened by qPCR specific for the actin gene of C. parvum and using nested PCR targeting the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp.. The qPCR showed positivity for C. parvum in 73,21% (153/209) of the samples, and nested PCR was positive for Cryptosporidium spp. in 56.5% (118/209) of the samples. The analytical sensitivity of qPCR foi de aproximadamente one oocyst C. parvum per reaction tube. Evaluation of analytical specificity did not reveal inespecific amplification for DNA of the following Cryptosporidium species and genotypes: C. bovis, C. andersoni, C. ryanae, C. canis, C. serpentis, C. galli, C. baileyi and avian genotype II. These results allowed the conclusion that qPCR for actin gene is a sensitive and specific technique for detection of C. parvum in fecal samples from calves