Influência do herpesvirus bovino tipo 5 no semen congelado de bovino sobre os parâmetros espermáticos e desenvolvimento embrionário in vitro

Abstract

Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro

This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes