Sensibilidade à antifúngicos sintéticos e naturais anti-Cryptococcus neoformans determinados por citometria de fluxo

Abstract

Cryptococcus neoformans é o patógeno fúngico mais comumente encontrado em infecções do sistema nervoso central, que desperta interesse devido a sua associação com os pacientes imunocomprometidos, em especial aqueles com AIDS. Embora haja ainda pouco relatados, isolados resistentes têm emergido nos últimos anos, e a disponibilidade de um método de sensibilidade rápido e reprodutível pode contribuir para a escolha do tratamento adequado. Os antifúngicos sintéticos possuem elevada toxicidade e sua disponibilidade na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente, o que reforça a demanda por novas alternativas terapêuticas. A busca por novos agentes antifúngicos a partir de plantas pode viabilizar o tratamento das principais micoses, diminuindo as reações adversas. Neste âmbito, pretendeuse padronizar a citometria de fluxo para a determinação da sensibilidade de anfotericina B e de substâncias de fontes naturais, comparando-as com o micrométodo. A citometria de fluxo foi utilizada no presente estudo para testar a sensibilidade de C. neoformans baseada na ligação de iodeto de propídeo na célula fúngica. Para tanto, isolados clínicos foram selecionados para análise da sensibilidade em citometria de fluxo depois de realizada a tipagem molecular de 151 isolados de Cryptococcus spp. das regiões de São José do Rio Preto e Rio de Janeiro por RFLP do gene URA5, em que a prevalência segue igual ao quadro mundial, em que o tipo molecular VNI é o mais prevalente, bem como verificou-se que a infecção por uma nova cepa e/ou diferentes espécies pode ocorrer com relativa freqüência. Foram ainda testados 57 extratos brutos, 52 frações e 53 substâncias puras isoladas de plantas do Cerrado e Mata Atlântica contra a cepa ATCC 90012 de C. neoformans...

Cryptococcus neoformans is a fungal pathogen most commonly found in infections of the central nervous system that arouses interest because of its association with immunocompromised patients, especially those with AIDS. Although have not been much reported, resistant isolates have emerged in recent years, and the availability of a method for rapid and reproducible susceptibility may contribute to the choice of treatment. The synthetic antifungal agents have high toxicity and its availability in medical practice is relatively small, sometimes inefficient, which reinforces the demand for new therapies. The search for new antifungal agents from natural products may facilitate the treatment of major fungal infections, reducing adverse reactions. In this context, we intended to standardize the flow cytometry to determine the susceptibility of amphotericin B and natural sources substances against C. neoformans, based on binding of propidium iodide (PI) in the fungal cell. For this, clinical isolates were selected for susceptibility analysis in flow cytometry after molecular typing of 151 Cryptococcus spp isolates from São José do Rio Preto and Rio de Janeiro by RFLP of the URA5 gene. The molecular type VNI is the most prevalent, as well as verified that infection by a new strain and / or different species can occur with relative frequency. We also tested 57 crude extracts, 52 fractions and 53 pure compounds isolated from plants of the Cerrado and the Atlantic forest against the C. neoformans ATCC 90012 strain. The pure substances sorbifolin, nitensoside B and isoquercitrin, from the plant Pterogyne nitens, presented MIC of 7.8μg/ml against C. neoformans, These data were confirmed by flow cytometry, after standardizing the method for amphotericin B, whose endpoint was 50% of the PI intensity, corresponding to the... (Complete abstract click electronic access below)