Desenvolvimento e identificação de mirossatélites para pirarara - Phractocephalus hemioliopterus (Siluriformes, Pimelodidae): para análise de variabilidade genética

Abstract

A pirarara (Phractocephalus hemioliopterus) é um bagre nativo das bacias do rio Amazonas e Tocantins-Araguaia que pode atingir na sua fase adulta cerca de 60 kg. A pirarara é comercializada como peixe ornamental e é um peixe atrativo para a pesca esportiva. A espécie pertence à família Pimelodidae e tem sido ameaçada em seu habitat devido à crescente interferência antrópica nas últimas décadas. O acesso aos dados sobre a situação destas populações constitui um importante meio para o delineamento de projetos de manejo, a fim de conservar a espécie e manter os estoques de reprodutores para piscicultura. Para este fim, os marcadores microssatélites são interessantes para estudos genéticos devido a sua natureza codominante e multialélica, características ideais para serem utilizados em estudos de mapeamento genético, identificação e elucidação de questões sobre a genética de populações de diferentes organismos. Neste contexto, o presente projeto teve por objetivo a identificação e seleção de marcadores moleculares tipo microssatélites para indivíduos da espécie Phractocephalus hemioliopterus, coletados nos Rios Araguaia e Rio das Mortes,e avaliar a estrutura e os níveis de diversidade genética nessas duas localidades. Inicialmente, foram seqüenciadas 67 colônias recombinantes, dos quais apenas 32 continham sequências repetitivas do tipo microssatélite. Destas, 62,5% eram repetições dinucleotídicas e o restante composto por trinucleotídeos e tetranucelotídeos repetidos de forma imperfeita. Deste total, foi possível desenhar primers para 26 loci. Após a amplificação por PCR, 9 loci se mostraram polimórficos e informativos, e foram testados em seis espécies próximas, para a investigação de regiões no DNA altamente conservadas, com sucesso de amplificação de 81,4%. A heterozigosidade observada...

The catfish pirarara (Phractocephalus hemioliopterus) is a native Amazonas and Tocantins-Araguaia basin fish, which can weigh up to about 60 kg in its adult form. The pirarara is marketed as an ornamental fish and it is an attraction for sport fishing. The species belongs to the family Pimelodidae and it has been threatened in its habitat due to increasing human interference in recent decades. Access to data on the situation of these populations is an important means for the design of management projects in order to conserve the species and maintaining the stocks of fish breeding. The microsatellite markers for genetic studies are interesting because of their codominant and multiallelic nature, ideal characteristics for use in studies of gene mapping, identification and elucidation of questions about population’s genetics of different organisms. In this context, this project aimed to identify and select microsatellite markers on Phractocephalus hemioliopterus individuals, collected in the Araguaia and das Mortes Rivers, and to evaluate the structure and levels of genetic diversity. Initially, 67 recombinat colonies were sequenced, of which only 32 contained repetitive sequences of the microsatellite type. Of these, 62.5% were dinucleotide repeats, and the remainder consisted of trinucelotide and tetranucleotide imperfect repeats. Of this total, it was possible to design primers for 26 loci. After PCR amplification, nine loci showed to be polymorphic and informative, and were tested on six related species for the investigation of highly conserved DNA regions, with a successful amplification of 81.4%. The observed heterozygosity ranged from 0.421 to 0.947. The two sites showed significant deviations from Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) (p<0.01) for some loci, which may be due to the presence of null alleles or even problems... (Complete abstract click electronic access below)