Detecção in silico e caracterização dos constituintes micromoleculares majoritários do fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de folhas de Garcinia xanthochymus usando HPLC-DAD-HRMS e GC-MS

Abstract

O fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides isolado de Garcinia xanthochymus, foi cultivado em pequena escala nos meios líquidos, (400 mL) MDB, Extrato de Malte, YM, Czapek e em meio sólido (150 g) de milho tipo canjica, a 28ºC, em regime estático. Após triagem por ensaios biológicos, e análise por 1H RMN e HPLC-DAD, os meios de milho e extrato de malte foram selecionados para o estudo químico, sendo cultivados em larga escala. As matrizes brutas foram submetidas a estratégias de separação e de desreplicação utilizando as técnicas hifenadas: cromatografia líquida acoplada a detector de arranjo de diodos e espectrometria de massas de alta resolução, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e também a ressonância magnética nuclear, sendo a detecção dos constituintes majoritários realizada in silico, através do uso de bases de dados públicas e pertencentes ao NuBBE. Os experimentos realizados permitiram a detecção de 14 substâncias: 6 por CG-MS (extrato DCM de milho) – dihexadecanoato de glicerila (1); trioctadec-9-enoato de glicerila (2); sn1`, 2` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (3); sn1`,3` octadeca-9,12-dienoato de glicerila (4); ácido 6,11-hexadecanóico (5); geranilinalol (6); e 7 por HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerina (8); sambutoxina (9); micosporina-glicina (10); ciperina (11); micosporina serina (12); arginomicina (13) e aspergillomarasmina B (14). Os compostos 2, 3 e 4, majoritários na matriz bruta foram isolados. Os metabolitos detectados por HPLC-DAD-HRMS (7-10) foram também detectados por 1H RMN

Colletotrichum gloeosporioides, an endophytic fungi isolated from Garcinia xanthochymus, was initially cultivated on the following liquid media (400 mL): MDB, YM, Czapek and static solid medium (150 g) using bleached corn at 28 C. After careful screening using bioassays, 1H NMR and HPLC-DAD, the corn and malt extract were selected for further studies and large-scale growth. The crude matrixes were submitted to several separation strategies using dereplication and hyphenated techniques such as high performance liquid chromatography coupled to a diode array detector (HPLC-DAD), high resolution mass spectrometry (HRMS), gas chromatography coupled to a mass spectrometer (GC-MS) as well as nuclear magnetic resonance (NMR). Most of the detected molecules were achieved using an in silico approach towards the data mining of public and NuBBE’s databases. This approach lead us to detect 14 substances; 6 by means of CG-MS (dichloromethane extract from corn’s media): glyceril dihexadecanoate (1); glyceril trioctadec-9-enoate (2); sn1`, 2` glyceril octadec-9,12-dienoate (3); sn1`, 3` gliceryl octadec-9,12-dienoate (4); 6,11-hexadecanóic acid (5); geranyl linalool (6); and 7 by means of HPLC-DAD-HRMS: colletodiol (7); fischerin (8); sambutoxin (9); micosporin glycin (10); cyperin (11); micosporin serin (12); arginomicin (13) e aspergillomarasmin B (14). Compounds 2, 3 and 4, been the most abundant in the matrix, were isolated and individually characterized. Compounds 7-10 were also confirmed using 1H NMR by means of in situ elucidation