Estudo químico e biológico do fungo endofítico C80 (Phaeosphaeriaceae) associado à alga marinha Bostrychia radicans

Abstract

Este trabalho teve como principal objetivo a obtenção de substâncias bioativas produzidas pelo fungo endofítico C80, pertencente à família Phaeosphaeriaceae, isolado da alga marinha Bostrychia radicans. O crescimento do endófito em escala ampliada foi realizado em meio sólido de arroz, modo estático e temperatura ambiente por 28 dias. O extrato em AcOEt produzido a partir deste cultivo foi fracionado através de técnicas cromatográficas, levando ao isolamento de seis substâncias: 7-hidroxi-3-(1-hidroxietil)-5-metoxi-3,4-dimetilisobenzofuran-1(3H)-ona (1), 3,7-dihidroxi-5-metoxi-3,4-dimetilisobenzofuran-1(3H)-ona (2), 7-hidroxi-3-(1,2-dihidroxietil)-5-metoxi-3,4-dimetilisobenzofuran-1(3H)-ona (3 e 4), 4,8-dihidroxi-6-metoxi-4,5-dimetil-3-metilenoisocroman-1-ona (5) e 8-hidroxi-6-metoxi-4,5-dimetil-3-metilenoisocroman-1-ona (6). Estas substâncias foram identificadas por análises espectroscópicas e espectrométricas como sendo policetídeos aromáticos, e então encaminhadas para ensaio citotóxico. Visando a mudança na produção metabólica do fungo, assim como na atividade biológica dos extratos brutos, foram realizados estudos da influência da composição do meio de cultura e do tempo de cultivo. Para a variação de composição, foram utilizados meios comerciais (CBD, Malte, Nutriente e arroz) e meios comerciais modificados com nitrato de amônio ou água do mar. Nenhuma alteração foi observada no perfil cromatográfico e nem na atividade citotóxica dos extratos. A variação do tempo de cultivo foi feita em meio sólido de arroz, com extrações em 10, 20, 30 e 40 dias de cultivo. Neste intervalo de tempo monitorado, a proporção dos metabólitos mudou consideravelmente, uma vez que os compostos majoritários no extrato de 10 dias estavam praticamente ausentes em 40 dias

The aim of this study was to obtain bioactive compounds produced by the endophytic fungus C80, belonging to the family Phaeosphaeriaceae, isolated from the marine algae Bostrychia radicans. This endophyte was cultivated in rice solid medium (large scale) in static mode at room temperature for 28 days. After addition of ethyl acetate, broth and mycelia were separated by filtration and the solvent was removed under vacuum to furnish the crude extract. The ethyl acetate extract was fractionated by using different chromatographic techniques resulting in the isolation of six compounds: 7-hydroxy-3-(1-hydroxyethyl)-5-methoxy-3,4-dimethyl-isobenzofuran-1(3H)-one (1), 3,7-dyhydroxy-5-methoxy-3,4-dimethylisobenzofuran-1(3H)-one (2), 7-hydroxy-3-(1,2-dihydroxyethyl)-5-methoxy-3,4-dimethylisobenzo-furan-1(3H)-one (3 e 4), 4,8-dihydroxy-6-methoxy-4,5-dimethyl-3-methyleneiso-chroman-1-one(5) e 8-hydroxy-6-methoxy-4,5-dimethyl-3-methyleneisochroman-1-one (6), which were identified as aromatic polyketides by using spectroscopic and spectrometric analysis and submitted to cytotoxicity assay. In addition, C80 was cultivated in different culture media at different periods of time to evaluate its chemical diversity and metabolites production. The cultures were undertaken using PDB, Malt, Nutrient and Rice media with or without the addition of ammonium nitrate or sea water. These procedures didn’t change the metabolic production and cytotoxicity. The role of time was undertaken only for rice media at 10, 20, 30 and 40 days of incubation. In this time the proportion of the metabolites has changed considerably, since the major compounds in the extract of 10 days, were practically absent in 40 days