Efeito do meio de congelação sobre as características morfofuncionais do sêmen canino

Abstract

Com o objetivo de se avaliar dois meios diluidores - Tris/Glicerol e MP50 - para a congelação do sêmen de cães, foram utilizados ejaculados de 10 cães adultos, colhidos por meio de manipulação digital. As características morfofuncionais foram analisadas no sêmen in natura (T1), refrigerado (T2) e descongelado (T3). As amostras foram avaliadas para: motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico, integridade de membrana espermática, morfologia espermática e análise ultra-estrutural, além da mensuração do pH. Após a diluição com os diferentes meios, o sêmen foi envasado em palhetas francesas de 0,5mL, contendo 40 x 106 espermatozóides móveis/palheta, e mantidas por 60 minutos à 5ºC (T2); logo após, foram transferidos para o vapor de nitrogênio durante 20 minutos, e por fim, mergulhadas em nitrogênio. O armazenamento das palhetas foi em botijão criogênico. As palhetas foram descongeladas a 70ºC por 8 segundos. A análise de variância mostrou influência do efeito animal nas variáveis analisadas, com exceção da motilidade espermática e integridade de membrana espermática. O teste hiposmótico, a integridade de membrana espermática e o pH, nas amostras refrigeradas (T2), apresentaram diferença estatística significativa (p<0,05) entre os meios, com superioridade do MP50. Nas análises pós-descongelação (T3), não foram observadas diferenças significativas entre as variáveis estudadas para os dois meios. A análise ultra-estrutural, mostrou edema de membrana plasmática e acrossomal, nas diferentes etapas do processo de congelação. Em conclusão, considerando-se as características morfofuncionais do sêmen canino pós-descongelação, os meios diluidores demonstraram igualdade.

The objective of this study was to verify the efficiency of two different extenders for freezing dog semen: Tris/Glycerol and MP50. Ten ejaculates from different adult dogs were collected by digital manipulation. Seminal characteristics were evaluated in three different moments, fresh (T1), cooled (T2) and thawed (T3) semen for sperm motility and vigor, hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity, sperm morphology, ultrastructural analysis and seminal pH. The samples were divided into two equal parts and each part was mixed with one extender type. After mixing, samples were packaged in 0,5mL French straws with 40 x 106 spermatozoa/straw. Semen samples were kept at 50C for 60 minutes (T2); then frozen in static vapor of nitrogen for the following 20 minutes and immersed in liquid nitrogen until being thawed in 700 C water for 8 seconds (T3). By analysis of variance, it would be possible to verify the animal effect on almost all variables observed in this study, except for sperm motility and membrane integrity. For cooled semen (T2), MP50 were significantly better for hypo-osmotic swelling test, sperm membrane integrity and pH (p<0,05) than Tris/Glycerol. For thawed semen (T3), there was no significant difference between extenders. By ultrastructural analysis, it was possible to verify swelling plasma and acrosomal sperm membranes in the different stages of freezing process. In conclusion, the extenders showed the same results as to morphofunctional characteristics the semen canine thawed.