Viabilidade de embriões ovinos vitrificados ou congelados submetidos às técnicas direta e indireta de inovulação

Abstract

O objetivo do presente trabalho foi testar a viabilidade de embriões ovinos produzidos in vivo criopreservados pelo método de vitrificação em OPS (Open Pulled Straw) ou congelação tradicional, comparando dois métodos (direto e indireto) de transferência dos embriões pós-aquecimento. Ao mesmo tempo, foi avaliado o efeito da criopreservação em diferentes estadios de desenvolvimento embrionário. Um grupo de 137 embriões com qualidades boa ou excelente foram obtidos de ovelhas Ile de France superovuladas. Mórulas e blastocistos foram distribuídos em três grupos: embriões frescos (n=50), embriões congelados (n=44) e embriões vitrificados (n=43). Os embriões destinados ao congelamento foram primeiramente equilibrados em solução de etilenoglicol em três passos (0,5M, 1,0M e 1,5M) por 5 minutos em cada passo, e criopreservados em equipamento automático de congelação. Os embriões vitrificados foram equilibrados em solução de 10% EG e 10% DMSO poe 1 minuto e 45 segundos e depois transferidos a solução de vitrificação com 20% EG e 20% DMSO por 30 segundos. Os embriões foram inovulados em receptoras sincrônicas, sendo utilizado dois métodos de transferência para os embriões criopreservados: direto e indireto. A viabilidade dos embriões foi determinada pela taxa de prenhez aos 30 dias através de ultra-sonografia em tempo real. A taxa de prenhez em receptoras inovuladas com embriões a fresco foi de 50%, sendo similar as taxas encontradas para embriões congelados (38,6%) e vitrificados (55,8%). No entanto, embriões vitrificados e inovulados pela técnica direta (57,1%) resultaram em maior taxa de gestação que os embriões congelados (34,8%) (P=0,07). Adicionalmente, embriões vitrificados mostraram maior viabilidade em estadio de mórula em relação aos embriões congelados no mesmo estadio (64,0% versus 38,9%) (P=0,07). Conclui-se que a vitrificação de embriões ovinos produzidos in vivo é uma biotécnica eficaz...

The aim of this study was to evaluate the viability of sheep embryos cryopreserved using vitrification in OPS or traditional freezing after direct and indirect transfer. The effect of cryopreservation was evaluated on different embryos stage. A total of 137 in vivo produced sheep embryos, which were classified as good or excellent by morphological criteria, were obtained from adult Ile de France ewes. Morulae and blastocysts were distributed into three groups. In the first group, non-cryopreserved embryos were transfer to recipients as counterpart (n=50). In group 2, embryos were cryopreserved by slow freezing method (n=44). In the third group, embryos were vitrified using OPS (n=43). In a first set of experiments, embryos at morulae and blastocysts stage were frozen in an automatic freezer using three steps of equilibrium in ethylene glycol (0.5M, 1.0M and 1.5M) for 5 minutes in each step. A second group of embryos were loaded into open pulled straw (OPS) and plunged into liquid nitrogen after exposure at room temperature (20°C) in 10% EG + 10% dimethyl sulphoxide (DMSO) for 1 minute and 45 seconds, then in 20% EG + 20% DMSO + 0.5 M sucrose for 30 seconds. The cryopreserved embryos were transferred directly and indirectly into synchronized recipients. Pregnancy rates were recorded 30 days after transfer. No significant difference was observed among fresh, frozen or vitrified embryos on pregnancy rate (50.0%, 38.6% and 55.8%). However, the pregnancy rate after direct transfer of OPS vitrified embryos was significantly higher than direct transfer of frozen embryos (57.1% versus 34.8%) (P=0.07).In the same way, early cleavage stage embryos vitrified (morulae) had higher viability than that frozen embryos (64.0% versus 38.9%) (P=0.07). In conclusion, our results indicate that the OPS vitrification technique in association with direct transfer improves the viability of sheep embryos with potential applications to field conditions.