Diferenciação entre os estágios agudo e crônico na infecção toxoplásmica pelo método de aglutinação direta modificado e pesquisa do agente no leite de ovelhas naturalmente infectadas por Toxoplasma gondii

Abstract

A toxoplasmose em ovinos é uma doença parasitária de grande importância médica veterinária, zootécnica e de saúde pública, uma vez que acarreta prejuízos na criação animal, gerado pelas perdas reprodutivas e econômicas, além de sua implicação na saúde humana, já que o consumo de carne e leite contaminados podem facilitar a transmissão zoonótica. Este estudo tem como propósito maior investigar a resposta imunológica das infecções naturais por Toxoplasma gondii em ovelhas, pela análise seqüencial de imunoglobulinas, objetivando a diferenciação entre os estágios agudo e crônico da doença, bem como a pesquisa do DNA do agente no leite pela técnica de PCR. Para realização do estudo utilizaram-se ovelhas em lactação, naturalmente infectadas por T. gondii, divididas em dois grupos: G1, com sorologia positiva, e G2, sorologicamente negativo, composto por 20 ovelhas cada um. A diferenciação dos estágios da infecção toxoplásmica, agudo ou crônico foi realizada pela técnica de aglutinação direta modificada (MAT) com antígeno fixado com formalina (MAT-AF) e metanol (MAT-AM) e pela Reação de Imunofluorescência Indireta para pesquisa de imunoglobulinas IgM e IgG. Os resultados sorológicos evidenciaram que as ovelhas demonstravam perfil sorológico de cronicidade da infecção. A detecção do parasito no leite foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), detectando-se o DNA do T. gondii em sete amostras de leite, provenientes de cinco ovelhas soropositivas, sendo que em duas ovelhas o DNA foi detectado no leite por duas vezes. A identidade molecular dos produtos amplificados foi confirmada pelo sequenciamento., obtendo-se de 97 a 100% de identidade com T. gondii, constituindo-se em resultado relevante quanto aos aspectos de saúde pública.

Toxoplasmosis is a major parasitary disease in sheep, due its importance in veterinary medicine and animal science and in public health, causing reproductive and economic losses to the herd, and also the prejudice to human health for the consumption of contaminated meat and milk, which can facilitate the zoonotic transmission. This study aims to investigate the immune response of natural infections by Toxoplasma gondii in sheep by sequence analysis of immunoglobulins, aiming to compare the acute and chronic stages of disease as well as DNA research agent in milk by the technique PCR. To accomplish the goal of this study, naturally infected by T. gondii lactating ewes were used, divided in two groups: G1, serologically positive, and G2, serologically negative, each group were composed by 20 ewes. The differentiation between the acute and chronic stages of the illness was made by the modified direct agglutination test (MAT) with antigens fixed with formaline (MAT-AF) and methanol (MAT-AM) and by the indirect fluorescent antibody test searching for IgM and IgG immunoglobulins. The serological results showed that the sheep showed serological profile of chronic infection. The detection of the parasite in milk was performed by polymerase chain reaction (PCR), detecting the DNA of T. gondii in seven milk samples from five seropositive sheep, and in two sheep DNA was detected in milk twice. The molecular identity of the amplified products was confirmed by sequencing, getting up for 97 to 100% identity with T. gondii, constituting an important result regarding the public health aspects