Obtenção e caracterização de antígenos de toxocara vitulorum por SDS-page e western blot

Abstract

Toxocara vitulorum é um parasita nematódeo de alta freqüência no trato intestinal de búfalos, particularmente em bezerros búfalos de um a três meses de idade. Devido à sua alta morbidade e mortalidade, causa consideráveis prejuízos a bubalinocultura. A pesquisa objetivou a obtenção de antígenos de extrato larval solúvel bruto (Ex), do material excretor-secretor (ES) de larvas infectantes e do líquido perientérico (Pe) de adultos de T. vitulorum, bem como a separação das frações protéicas na mistura pelo SDS-PAGE, seguida da análise imunológica por Western blot (WB), utilizando-se soros imunes e colostros de búfalos naturalmente infectados com T. vitulorum além de camundongos imunes. O acompanhamento do quadro parasitário dos bezerros búfalos também foi realizado. Pôde-se verificar que os três antígenos, Pe, Ex e ES, apresentaram mobilidades eletroforéticas pelo SDS-PAGE revelando nove (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112 e 165 KDa), onze (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82 e 96 KDa) e oito (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150 e 190 KDa) bandas protéicas, respectivamente. A maioria dessas frações separadas pela eletroforese, foi reconhecida por todos as amostras de soros e pelo colostro, quando analisada pelo WB. No entanto, somente as bandas de alto peso molecular (68 - 190 KDa) persistiram nos grupos de bezerros búfalos que se encontravam no pico, declínio ou expulsão e na ausência ou autocura, à exceção do antígeno ES, que desapareceu durante o processo de autocura. Já os soros de bezerros búfalos com um de vida, que mamaram o colostro e os daqueles que se encontravam em fase de aparecimento ou ascensão, revelaram com as mesmas frações detectadas no soro e no colostro das búfalas. Os três antígenos reagiram de forma cruzada entre si, quando foram testados com soros homólogos e heterólogos de camundongos imunizados experimentalmente com estes antígenos de T. vitulorum

Toxocara vitulorum is a nematode parasite of small intestine of cattle and water buffaloes particularly buffalo calves with one to three months of age, causing high morbidity and mortality. The purpose of this research was the antigen obtaintion and characterization of crude soluble larval extract (Ex), excretory-secretory (ES) of infective larvae, and perienteric fluid (Pe) from adults of T. vitulorum, as well as the separation of protein fractions from the antigenic mixture by SDS-PAGE and analysis of each band by Western blot (WB), using immune sera and colostrum of buffaloes naturally infected by T. vitulorum, and mice experimentally immunized. The parasitological status of the buffalo calves was also evaluated using sequentially coprological examinations. The results showed that three antigens, Pe, Ex and ES, revealed nine (11,5, 14,2, 31, 38, 58, 76, 88, 112, and 165 KDa), eleven (11,2, 13,3, 16,5, 22, 25, 32, 43, 53, 68, 82, and 96 KDa) and eight (19, 48, 56, 64, 90, 110, 150, and 190 KDa) protein bands by SDS-PAGE, respectively. The majority of these isolated bands were recognized by sera and colostrum of all groups of infected animals (buffalo cows one day post parturition and buffalo calves in five different periods of T. vitulorum infection) analyzed by WB. However, only the fractions of high molecular weight (68 - 190 KDa) persisted in the groups of buffalo calves at maximum peak of infection, expulsion and post-expulsion of the parasite or self-cure process, excepting ES antigen, that was not detected during the self-cure process. Sera of buffalo calves at one day of age, after suckling the colostrum and at the beginning of infection reacted with the same bands detected by serum and colostrum of the buffalo cows. The three antigens showed crossed reaction among themselves, when they were tested with homologous and heterologous sera of mice experimentally immunized with them