Identificação de proteínas ligantes de CRABP2, proteína envolvida na via de sinalização celular por ácido retinóico

Abstract

Ácido retinóico (AR) regula a transcrição de uma série de genes envolvidos em proliferação celular, diferenciação celular e apoptose através de sua ligação com o receptor de ácido retinóico (RAR) ligado com o receptor de retinóide X (RXR) na forma de heterodímero. A proteína ligante de ácido retinóico celular (CRABP2) é envolvida no transporte do AR do citoplasma para o núcleo, atuando assim como uma proteína coativadora dos receptores retinóides nucleares. Com o objetivo de melhor entender o mecanismo de sinalização celular por ácido retinóico envolvendo CRABP2, foi utilizado o sistema de duplo-híbrido em levedura como uma ferramenta para identificação de interações físicas proteína-proteína. Um total de 20 proteínas candidatas ligantes de CRABP2 foram identificadas no rastreamento de duplo-híbrido, das quais cinco são relacionadas com regulação da transcrição, mais especificamente com o processo de remodelagem da cromatina: polipeptídeo do complexo T (TCP1), histona H3/família 3A (H3F3A), histona H3/família 3B (H3F3B), tubulina beta (TUBB) e fator associado ao CTD relacionado com SR (SCAF1). Esses resultados sugerem um papel mais direto de CRABP2 na remodelagem de cromatina e poderá revelar novos aspectos da regulação da transcrição mediada por receptores de ácido retinóico. Além disso, também foi abordado neste trabalho um estudo dos níveis de expressão dos receptores de ácido retinóico em resposta a agentes desmetilantes

Retinoic acid (RA) regulates the transcription of a series of genes involved in cell proliferation, differentiation and apoptosis by binding to RA Receptor (RAR) and Retinoid X Receptor (RXR) heterodimers. The cellular retinoic acid-binding protein 2 (CRABP2) is involved in the transport of RA from the cytosol to specific RA receptors in the nucleus, acting as a coactivator of nuclear retinoid receptors. In order to have a better understanding of the mechanism of cellular signaling by retinoic acid involving CRABP2, we used the yeast two-hybrid system as a tool for the identification of physical protein-protein interactions. A total of twenty putative CRABP2-interacting proteins were identified in the two-hybrid screen, out of which five are related to transcription regulation, more specifically to the process of chromatin remodeling: t-complex 1 (TCP1); H3 histone, family 3A (H3F3A); H3 histone, family 3B (H3F3B); tubulin beta (TUBB) and SR-related CTD-associated factor 1 (SCAF1). These results suggest a more direct role for CRABP2 in chromatin remodeling and may reveal new aspects of the control of transcription by RA receptors. Furthermore, we have also investigated the expression levels of the retinoic acid receptors, in mammalian cells in response to demethylating agents