Análise citogenética clássica e molecular em Chelonoidis carbonaria e Phrynops geoffroanus (Testudines)

Abstract

Os répteis sofreram redução do número de espécies desde a época em que dominavam a Terra até os dias atuais. Os quelônios são poucos estudados, principalmente quanto à sua caracterização citogenética. O presente trabalho objetivou estudar, por meio das técnicas de citogenética clássica e molecular, os cromossomos de Chelonoidis carbonaria, espécie terrestre e Phrynops geoffroanus, espécie ameaçada de extinção que vive nas margens dos rios no continente Sul Americano. As amostras de sangue foram coletadas de animais do criatório, “Reginaldo Uvo Leone”, em Tabapuã-SP. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal (nº 50/07-CEEA – Botucatu – SP) e pelo IBAMA/RAN (nº 14729-1). Para obter as metáfases, o sangue foi inoculado em meio de cultura de linfócitos que foram estimulados a se dividirem pela adição de fito-hemaglutina. Após esse procedimento, a colchicina foi adicionada para inibir a formação das fibras do fuso, mantendo as células em metáfase. Foram avaliados machos e fêmeas de Chelonoidis carbonaria, que apresentaram número de cromossomos igual a 2n = 52, e de Phrynops geoffroanus, descrito pela primeira vez, cujas fêmeas apresentaram 2n = 58 e os machos com 2n = 57 cromossomos. Pela metodologia de bandamento G, foi possível identificar os pares de cromossomos homólogos, e pela técnica de bandamento C, a presença de regiões de heterocromatina constitutiva em macrocromossomos e em microcromossomos. Pela impregnação com íons prata, foram detectadas Regiões Organizadoras Nucleolares (RONs) em dois microcromossomos nos machos e em apenas um microcromossomo nas fêmeas de Chelonoidis carbonaria. O mesmo padrão foi encontrado em Phrynops geoffroanus. A técnica de FISH revelou a presença dos sítios de RNAr marcados na Região Organizadora Nucleolar. O presente estudo permitiu, pelas técnicas de citogenética...

The reptiles were reduced in number of species since the time that they ruled the Earth until the present day. The turtles have been little studied, particularly regarding its cytogenetics. The present study investigated, using the techniques of classical cytogenetics and molecular chromosomes of Chelonoidis carbonaria terrestrial species and Phrynops geoffroanus, endangered species that lives along the rivers in the South American continent. Blood samples were collected from animals in the breeding Reginaldo Uvo Leone in Tabapuã-SP. All procedures were approved by the Animal Ethics Committee (nº 50/07-CEEA - Botucatu – SP) and IBAMA/RAN (nº. 14729-1). For the metaphases, the blood was inoculated into the culture medium of lymphocytes that were stimulated to divide by the addition of phyto-hemagglutinin. After this procedure, colchicine was added to inhibit the formation of spindle fibers, maintaining the cells in metaphase. We assessed male and female Chelonoidis carbonaria, which had the same number of chromosomes 2n = 52 and specimens of Phrynops geoffroanus, first described, whose females had 2n = 58 and males with 2n = 57 chromosomes. By G-banding methodology, it was possible to identify pairs of homologous chromosomes and the C banding technique, the presence of regions of constitutive heterochromatic in macrochromosomes and microchromosomes. By impregnation with silver ions were detected Nucleolar Organizer Regions (NORs) in two microchromosomes in males and females in only one of microchromosomes Chelonoidis carbonaria.The same pattern was found in Phrynops geoffroanus. The FISH technique revealed the presence of sites of rRNA marked Nucleolar Organizing Region. This study allowed for the techniques of classical and molecular cytogenetics to identify the chromosomes of males and females of Chelonoidis carbonaria and Phrynops geoffroanus, terrestrial and aquatic... (Complete abstract click electronic access below)