Efeito da fração polissacarídica do cogumelo Agaricus brasiliensis sobre a produção de citocinas e de fatores angiogênicos no microambiente tumoral

Abstract

A ATF (fração ácido-tratada) é uma fração polissacarídica extraída do cogumelo Agaricus brasiliensis rica em (1→6)-β-D-glucana, à qual se atribui ação imunoestimulante. No presente trabalho, avaliamos o efeito da ATF sobre a produção de citocinas, a expressão de mRNA de fatores angiogênicos e a infiltração de leucócitos no microambiente do tumor de Ehrlich, subcutaneamente implantado em camundongos BALB/c. O tratamento consistiu de 3 aplicações de ATF (0,5 mg/0,1mL) no sítio de implantação tumoral, seguido de sacrifício dos animais aos 7 ou 14 dias após a implantação do tumor. A massa tumoral foi removida para a obtenção das células infiltradas no tumor de Ehrlich e para análise do número de células secretoras de citocinas (ELISPOT). Foi realizada a análise dos fatores pró-angiogênicos pela técnica de PCR em tempo real e a presença in situ de células imunocompetentes, foi analisada através de microscopia confocal. Aos 7 dias observou-se maior número de células secretoras de IL-4 e IFN-γ no grupo Ehr/ATF e aos 14 dias a capacidade de produção de IL-10 mostrou-se aumentada no grupo Ehr, fenômeno revertido pelo tratamento com a ATF, que induziu aumento no número de células produtoras de IFN- γ. Esses achados são compatíveis com a observação de que os animais tratados com a ATF apresentaram marcação mais intensa para as células CD8+ e Mac-3+. Em relação aos fatores angiogênicos, observamos que aos 7 dias, o tratamento inibiu a produção de FGF-2 no microambiente tumoral. Assim, concluímos que a ATF, através da indução da produção de IFN-γ, foi capaz de reverter parcialmente a produção de IL-10 induzida pelas células tumorais, estabelecendo um microambiente menos favorável ao desenvolvimento do tumor.

The acid treated fraction (ATF) is a polysaccharidic (1-6)-β-D-glucan-rich fraction obtained from A. brasiliensis, with putative immunostimulatory activity. The present study was undertaken to examine the effect of ATF on cytokine production and expression of mRNA of angiogenic factors in the microenvironment of subcutaneous Ehrlich tumor mass. BALB/c mice were subcutaneously inoculated with Ehrlich tumor cells (day zero), followed by in situ administration of sterile salt solution (group Ehr) or with 0,5 mg/0,1mL of ATF (group Ehr/ATF) on day 3, 4 and 5. These animals were sacrificed on the 7th or 14th day for evaluations. Tumor tissue was removed to obtain infiltrated cells and for analyze the number of cytokine producing cells (ELISPOT). The pro-angiogenic factor were analyzed by real time PCR and phenotype of infiltrated immunocompetent cells was analyzed by confocal microscopy. On the 7th day, increased number of IL-4 and IFN-γ- producing cells was observed in the Ehr/ATF group. On the 14th day Ehr group showed increased number of IL-10-producing cells, whereas this occurrence was avoided by treatment with ATF (Her/ATF). Treatment also increased the number of IFN-γ producing cells in that time. These data are in accordance with the stronger labeling of tumor tissue for CD8 and Mac-3. Concerning to angiogenic factor, on the 7th day, the treatment decreased the FGF-2 mRNA expression by tumor tissue. In summary, our data allow us to conclude that ATF was able to partially reverse the production of IL-10 induced by tumor cells, through the induction of higher levels of IFN-γ-producing cells, perhaps establishing a more efficient immunoresponsiveness against tumor.