N-acetilcisteína e trolox na conservação de células espermáticas epididimárias de cães

Abstract

O objetivo foi verificar se a suplementação do meio diluente Tris-gema com Trolox, N-acetilcisteína (NAC) ou a associação de ambos, em três concentrações distintas (0,15; 0,25 e 0,35mM), possibilitaria ou não a melhora na qualidade da preservação das células espermáticas nos processos de refrigeração e congelação. Foram utilizadas 15 unidades experimentais (UE), cada qual constituído pelo recuperado espermático de cinco cães hígidos (n=75) submetidos à orquiectomia eletiva. Estes, por sua vez, foram igualmente divididos em três grupos experimentais: grupo I (GI), II (GII) e III (GIII), os quais tiveram a adição de antioxidantes nas concentrações de 0,35, 0,25 e 0,15mM, respectivamente. Cada UE foi dividido em três partes, uma foi avaliada a In Natura, outra após a refrigeração por 48 horas, e a terceira após a congelação/ descongelação. Ato continuo, cada parte foi subdividida em quatro amostras de igual volume, que foram centrifugadas e o sobrenadante armazenado. O concentrado de espermatozoides foi ressuspendido em meio diluente Tris-gema, puro, ou acrescido de Trolox, NAC ou de ambas. Os espermatozoides foram avaliados quanto à motilidade, vigor, teste vital, índice de atividade citoquímica, integridade de membrana, mensuração do total das espécies reativas de oxigênio e radical hidroxila. Os dados obtidos foram submetidos à análise de regressão logística Proc Glimmix e teste de correlação de Pearson (p<0,05). Após a criopreservação foi observado que adição dos antioxidantes diminuiu a produção total de ROS. As concentrações e antioxidantes utilizados foram suficientes para manutenção da motilidade, integridade de membrana e atividade mitocondrial após a descongelação e refrigeração. Averiguou-se ainda que existe uma correlação positiva entre a quantidade total de ROS no fluido epididimário com o índice de atividade mitocondrial, e negativa com a integridade de membrana. Deste modo, concluímos que a adição destes antioxidantes em baixas concentrações foi benéfica à criopreservação do sêmen.

The aim of the present study was to evaluate whether the supplementation of the Tris egg-yolk extender with three different concentrations (0,15; 0,25 and 0,35mM) of N-acetyl cysteine (NAC), Trolox or the association of both, would improve the quality of sperm cells after chilling and freezing. Fifteen experimental units (EU), each one consisted by epidydimal sperm recovered from five healthy dogs (n=75) after elective orchiectomy were used in this study. The EU were equally divided into three experimental groups. Group I (GI), II (GII) and III (GIII) had the addition of 0.35, 0.25 and 0.15mM of antioxidants, respectively. Each group was divided into three aliquots, the first one was evaluated at the moment of the collection, the second aliquot was chilled for 48 h and the third was frozen. Subsequently, each EU was divided into four aliquots of equal volume and immediately centrifuged, the supernatant was discarded and the concentrated sperm resuspended in TRIS extender supplemented with Trolox and/or N-acetyl cysteine. Sperm total and progressive motility, vital test, cytochemical activity indexes membrane integrity, and measurement of reactive oxygen species (ROS) by TBARS and TAC were performed. Data were statistically analyzed by logistic regression analysis Proc GLIMMIX and Pearson correlation test (P <0.05). After cryopreservation the addition of antioxidants reduced total production of ROS. The concentrations and antioxidants chosen in this study were sufficient to maintain motility, membrane integrity and mitochondrial activity after thawing and cooling. A positive correlation was noticed between the total amount of ROS in the epididymal fluid with mitochondrial activity index, and negative correlation with membrane integrity. Thus, we conclude that the addition of these antioxidants in low concentrations was beneficial to the cryopreservation of semen.