Comparação de métodos para extração de dna na reação em cadeia da polimerase para detecção de Salmonella enterica sorovar enteritidis em produtos avícolas

Abstract

The identification of Salmonella spp. in food samples by microbiological diagnosis is time consuming, with approximately five different stages, requiring about 120 hours until the final result. The utilization of the polymerase chain reaction technique (PCR) can reduce this time, but substances present in samples may affect the reaction. The present work aimed to compare DNA extraction by thermic treatment and by the use of cetyltrimethil ammonium bromide (CTAB), in products originated from poultry houses corresponding to raw material (meat meal) and experimentally contaminated drag swabs. Materials obtained from the extractions were submitted to PCR, utilizing a pair of initiator oligonucleotides for amplification of Sdf 1 gene fragments. Comparing the methods of extraction, it was observed that when CTAB was employed, SE was detected in 70% of meat meal and in 80% of drag swabs, while the thermic treatment method yielded positive results in 20% of meat meal and in 40% of drag swabs. SE was detected under both methods utilized for DNA extraction, but the use of CTAB detected a greater number of positive samples, compared with thermal treatment.

A identificação de Salmonella spp. em amostras de alimentos por diagnóstico microbiológico é demorada, com aproximadamente cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilização da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) pode diminuir esse período; entretanto, substâncias presentes nas amostras podem afetar a reação. O objetivo deste trabalho foi comparar a extração de DNA de Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE), por tratamento térmico e pelo uso do cetyltrimethil ammonium bromide (CTAB), em produtos provenientes de granjas avícolas, correspondentes a matéria prima (farinha de carne) e a suabes de arrasto experimentalmente contaminados. As amostras de DNA obtidas com as extrações foram submetidas a PCR, utilizando-se um par de oligonucleotí- deos iniciadores para amplificação de DNA do gene específico de SE – Sdf 1. Comparando-se os métodos de extração, observou-se que quando do uso do CTAB detectou-se SE em 70% de matéria prima e em 80% de suabes de arrasto, enquanto com o método por tratamento térmico houve positividade em 20% de matéria prima e em 40% de suabes de arrasto. Houve detecção de SE em ambos os métodos utilizados para extração de DNA, porém, o uso de CTAB detectou maior número de amostras positivas, quando comparado com o tratamento térmico.