Implicações do uso do extrato de LBD (Lipoproteinas de Baixa Densidade) ou da gema de ovo 'purificada', sobre a motilidade e morfologia espermática no sêmen ovino refrigerado por 24 ou 48 horas

Abstract

The objective was to study the effects of substitution of fresh egg yolk for egg yolk "purified" (EYp) or the extract of low-density lipoprotein (LDL) in extenders on the total motility (TM) and progressive motility (PM), acrosomal retention (AR) and the percentage of sperm tail folded (STF) in sheep semen cooled. Twenty ejaculates from five Dorper sheep were diluted in extender Glycine Yolk Milk (GGL - control), Glycine “purified” Yolk Milk (GGpL) or Glycine Extract Milk (GEL), cooled for 24 or 48 hours and subjected to the test depletion of 120 minutes. Analysis of TM and PM was held in HTMA (IVOS 12) in five moments: M0 - immediately after dilution, M1 and M3 - after refrigeration for 24 or 48 hours respectively, M2 and M4 - after 24 or 48 hours of cooling and incubation for 120 minutes at 37°C. In microscopy of phase contrast, using wet preparations with glutaraldehyde, we assessed the RA and the percentage of the STF at M0 to M4. TM was not affected by chilling time regardless of medium used (P>0.05), but declined (P<0.05) after the cooling / exhaust (M2 and M4). The PM declined by 48 hours regardless of the cooling extender used, obtaining better results using GEL, at the moment (M3), compared to control (P<0.05). The exhaust also decreased the PM after two moments of refrigeration, but in the middle GGpL in M2 showed a value higher than the control (P<0.05). The process of cooling and incubation postcooling is not depreciated substantially the quality of sperm morphology, and in any of the times the mean RA was less than 93.8% and of the STF above 5.4%. The extenders GEL and GGpL preserved unchanged the RA during cooling for 24 or 48 hours. There was a decline after the exhaustion of RA (M2 and M4, P<0.05), but the extender GGpL performed better on the M4 (P<0.05). There was no effect of environment on the occurrence of STF, however the GGpL prevented the increase of the bending of sperm tails at all times studied. Then it's possible to replace the fresh egg yolk by the EYp or the extract of LDL in the extender for cooling GGL sheep semen for up to 48 hours, without altering the parameters of sperm motility and morphology.

El objetivo fue estudiar los efectos de la sustitución de la yema de huevo fresco por la yema de huevo "purificada" (YHp) o el extracto de la lipoproteína de baja densidad (LBD) en los diluyentes, sobre la motilidad total (MT) y la motilidad progresiva (MP), la retención acrosomal (RA) y el porcentaje de cola espermática plegado (CEP) en el semen ovino refrigerado. Veinte eyaculados de cinco carneros raza Dorper fueron diluídos en los medios Glicina Yema Leche (GGL - control), Glicina Yema purificado Leche (GGpL) y Glicina Extracto Leche (GEL), refrigerado por 24 o 48 horas y sometidos a la prueba de agotamiento por 120 minutos. El análisis de MT y MP se llevó a cabo en HTMA (IVOS 12) en cinco momentos: M0 - inmediatamente después de la dilución, M1 y M3 - después de la refrigeración durante 24 o 48 horas, respectivamente, M2 y M4 - después de 24 o 48 horas de refrigeración y la incubación durante 120 minutos a 37°C. En la microscopía de contraste de fase, utilizando preparaciones en fresco con glutaraldehído, se evaluó la RA y el porcentaje de la CEP de M0 a M4. La MT no se vio afectada por el tiempo de refrigeración, independientemente del medio utilizado (P>0,05), pero se redujo (P<0,05) posterior al periodo de refrigeración/agotamiento (M2 y M4). La MP declinó a las 48 horas, independientemente del medio de refrigeración utilizado, obteniéndo-se mejores resultados con el uso de GEL, en el momento (M3), en relación con el control (P<0,05). El agotamiento también redujo el MP después de dos tiempos de refrigeración, pero en el M2, el medio de GGpL mostró un valor más alto que el de control (P<0,05). El proceso de refrigeración y la incubación después de la refrigeración, no disminuyó sustancialmente la calidad de la morfología de los espermatozoides, y en ninguna de las veces la media de RA fue inferior al 93,8% y de la CEP, superior a 5,4%. Los medios de GEL y GGpL conservan la RA sin cambios durante el enfriamiento de 24 o 48 horas. Se observó una disminución después del agotamiento de la RA (M2 y M4, P<0,05), pero el medio GGpL presentó mejores resultados en el M4 (P<0,05). No hubo efecto del medio sobre la incidencia de la CEP, sin embargo, el GGpL impidió el aumento de la curvatura de la cola de los espermatozoides en todo los momentos estudiados. Se concluye, que es posible sustituir la yema de huevo fresca por la yema de huevo purificada o el extracto de LBD en el medio GGL para la refrigeración de semen ovino para un máximo de 48 horas, sin alterar los parámetros de motilidad y la morfología espermática.

Objetivou-se estudar os efeitos da substituição da gema de ovo in natura pela gema de ovo “purificada” (Gp) ou pelo extrato de lipoproteína de baixa densidade (LBD) em meios diluidores, sobre a motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP), retenção acrossomal (RA) e o percentual de cauda espermática dobrada (CED), de sêmen ovino refrigerado. Vinte ejaculados, de 5 carneiros da raça Dorper foram diluídos em meios Glicina Gema Leite (GGL - controle), Glicina Gema “purificada” Leite (GGpL) ou Glicina Extrato Leite (GEL), refrigerados por 24 ou 48 horas e submetidos à teste de exaustão de 120 minutos. Análise da MT e MP foi realizada em HTMA (IVOS 12) em cinco momentos: M0 - imediatamente após a diluição, M1 e M3 - após a refrigeração por 24 ou 48 horas respectivamente; M2 e M4 - após refrigeração de 24 ou 48h e incubação por 120 minutos a 37oC. Em microscopia de contraste de fase, empregando-se preparações úmidas com solução de glutaraldeído, avaliouse a RA e o percentual de CED nos momentos M0 ao M4. A MT não foi influenciada pelo tempo de refrigeração independente do meio utilizado (P>0,05), porém declinou (P<0,05) após a refrigeração/exaustão (M2 e M4). A MP declinou em 48h de refrigeração independente do meio utilizado, obtendo-se melhores resultados no meio GEL, neste momento (M3), em relação ao controle (P<0,05). A exaustão também fez diminuir a MP após os dois tempos de refrigeração, porém no M2 o meio GGpL apresentou valor superior em relação ao controle (P<0,05). O processo de refrigeração e incubação pós-refrigeração não depreciou substancialmente a qualidade da morfologia espermática, sendo que em nenhum dos momentos as médias da RA foram inferiores a 93,8% e as da CED superiores a 5,4%. Os meios GGpL e GEL preservaram inalterada a RA durante a refrigeração por 24 ou 48 horas. Houve declínio da RA após a exaustão (M2 e M4, P<0,05), porém o meio GGpL apresentou melhor desempenho no M4 (P<0,05). Não houve efeito do meio sobre a ocorrência de CED, entretanto o GGpL preveniu o aumento do dobramento de cauda espermática em todos os momentos estudados. Conclui-se ser possível a substituição da gema de ovo in natura pela Gp ou pelo extrato de LBD no meio GGL para a refrigeração do sêmen ovino por até 48 horas, sem prejuízos aos parâmetros espermáticos de motilidade e morfologia.