Analysis of proteins from membrane and soluble fractions of Giardia duodenalis trophozoites of two Brazilian axenic strains

Abstract

Foi realizada a análise de algumas características bioquímicas e antigênicas de duas cepas axênicas de Giardia duodenalis, isoladas em Botucatu, a partir de cistos obtidos de paciente sintomático (BTU-11) e assintomático (BTU-10), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1), isolada e axenizada nos Estados Unidos. Preparações contendo proteínas de membranas e proteínas solúveis (citosol) de cada cepa foram empregadas na eletroforese das proteínas em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), na análise de glicoproteínas pela técnica de Con A blot e na análise antigênica pela técnica de Immunoblotting. Na análise do perfil eletroforético os padrões de bandas de proteínas das cepas BTU-10 e BTU-11 foram complexos e na maior parte homogêneos; algumas diferenças foram detectadas entre as proteínas de membranas. Várias glicoproteínas foram demonstradas, destacando-se as de 81, 72, 59 kDa e a glicoproteína de 62 kDa, detectadas nas preparações de proteínas de membranas e proteínas solúveis, respectivamente. Entre estas glicoproteínas, a de 81 kDa foi detectada apenas entre as proteínas de membranas das cepas BTU-11 e P-1, isoladas de casos sintomáticos. Vários componentes antigênicos foram reconhecidos por anticorpos IgG de coelho pela técnica de Immunoblotting. Entre estes componentes, as proteínas de 32 kDa, entre as proteínas de membranas e a de 30 kDa, entre as proteínas solúveis, parecem tratar-se de proteínas já caracterizadas como giardinas. O presente trabalho possibilitou detectar glicoproteínas, proteínas e antígenos em trofozoítos de duas cepas autóctones de G. duodenalis. de modo geral, as análises dos perfis eletroforético e glicoproteico e do immunoblotting demonstraram similaridade entre as cepas.

In the present study, we have analyzed by sodium docecyl sulphate - polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), immunoblotting and Concanavalin A blotting (Con A blotting) proteins of membrane fractions and soluble fractions obtained from Giardia duodenalis trophozoites of two axenic strains isolated in Brazil from a symptomatic (BTU-11) and an asymptomatic patient (BTU-10), as compared to the reference strain Portland 1. Both Brazilian strains showed a complex and homogeneous electrophoretic pattern of proteins, but some differences could be observed. Several glycoproteins were detected, particularly the proteins of 81, 72, 59 kDa and the protein of 62 kDa in the membrane proteins and cytosol, respectively. Many antigenic components were revealed by anti-Giardia rabbit IgG antibodies in the immunoblotting analysis. Among these components, the membrane protein of 32 kDa and the cytosol protein of 30 kDa could be related to giardin, as previously demonstrated.