Expressão das proteínas osteoprotegerina, RANK e RANKL durante o processo de reparo alveolar em ratos: estudo imunoistoquímico

Abstract

Na dinâmica da reparação óssea os fenômenos de reabsorção e neoformação são dependentes e acoplados. Proteínas efetivamente envolvidas na diferenciação celular determinam ativação ou inibição das atividades que regulam o ganho ou perda de massa óssea. Dentre as proteínas ósseas identificadas e envolvidas na dinâmica óssea podemos destacar a OPG, a RANK e RANKL como marcadores de atividades celulares. O presente trabalho tem como objetivo identificar, nos diferentes períodos da cronologia do processo de reparo alveolar através de técnica imunoistoquímica, a presença das proteínas OPG, RANK e RANKL. Para tanto foram utilizados 60 ratos machos submetidos à exodontia do incisivo superior direito e perfundidos aos 14, 21 e 28 dias pós-operatórios. As hemi-maxilas contendo o alvéolo dental em reparação foram removidas, pósfixadas, descalcificadas em EDTA, crioprotegidas e obtidos cortes longitudinais com 14æm em criostato. Os cortes foram submetidos à reação imunoistoquímica mediante a utilização de anticorpos primários para OPG, RANK e RANKL, como amplificador foi utilizado o sistema avidina-biotina e a diaminobenzidina (DAB) como cromógeno. Os resultados mostram que qualitativamente ocorre um balanço na expressão das proteínas que caracterizam reabsorção e neoformação óssea nos diferentes períodos estudados, onde aos 14 e 21 dias ocorre maior expressão de RANK. Com relação às proteínas OPG e RANKL, observa-se que elas apresentam-se expressas nas células da linhagem osteoblástica de forma similar, sendo que 28 dias é o período de maior expressão destas proteínas.

In the bone healing dynamics, the resorption and neoformation processes are dependent. Proteins involved in the cellular differentiation determinate the activation or inhibition of the activities that regulate the gain or loss of bone mass. From all of the identified bone proteins, it may be distinguished the OPG, RANK and RANKL. The present study has the aim to identify, in the different periods of alveolar bone healing chronology, the expression of OPG, RANK and RANKL proteins using the immunohistochemistry methodology. To perform this study, 60 male rats had the right upper incisive extracted and they were perfused at 14, 21 and 28 pos-operative days. The hemimaxilla with the rat extraction socket was removed, pos fixed and decalcified in EDTA. Then, they were cryoprotected and longitudinal slices with 14 ìm thickness were obtained in cryostat. The slices were submitted to immunohistochemistry reaction and the primary antibodies used were against OPG, RANK and RANKL proteins. It was used the avidinbiotin system to amplify the sign and diaminobenzidine was the cromogen. The results show that there is a balance in the expression of the proteins, showing that there is an increase in the expression of RANK at 14 and 21 pos-operative periods. In relation to OPG and RANKL, these proteins presents a similar expression in all of the pos-extraction periods analysed in this study and at 28 days after the extraction there is the greater expression of both proteins.