Avaliação clinica e histopatológica da cicatrização de úlceras de córnea experimentais em coelhos, com deficiência de células límbicas, recobertas com membrana amniótica xenógena criopreservada em diferentes meios

Abstract

A superfície ocular normal é composta pelos epitélios da córnea, conjuntiva e limbo, cada qual com um distinto fenótipo celular; juntos, formam uma unidade funcional responsável pela manutenção da integridade desta superfície. O presente estudo visou avaliar as alterações relacionadas à deficiência das células precursoras do epitélio corneano, presentes no limbo, e o efeito do transplante de membrana amniótica, conservada em diferentes meios, sobre esta deficiência. A lesão foi induzida pelo contato do n-heptanol com a superfície da córnea e do limbo, associado à peritomia conjuntival em 360° em coelhos; em seguida, foi recoberta com membrana amniótica canina, suturada à episclera perilímbica, criopreservada em meio próprio para conservação ou em meio utilizado para conservação de embrião, ambos com glicerol a 50% e mantidos a -80°C, à exceção do grupo controle, não tratado com a membrana. Os animais foram submetidos à avaliação clínica diária e morfológica aos sete, 15 e 30 dias. Todos desenvolveram sinais de deficiência de células límbicas, denominada conjuntivalização, caracterizada pela presença de neovascularização, inflamação crônica e defeitos epiteliais recorrentes; ao exame histopatológico da córnea observou-se presença de neovasos, edema, leucócitos e células caliciformes. O transplante de membrana amniótica não foi eficiente para o tratamento da deficiência total de células germinativas límbicas, entretanto auxiliou o processo de cicatrização, sendo mais eficiente quando preservada em meio para conservação de embrião. Palavras-chave: coelho; córnea; criopreservação; histopatologia; membrana amniótica.

A normal ocular surface is composed by corneal, conjunctival and limbal epithelia, each having distinct cellular phenotypes; together, they form a functional unit, which is responsible for maintaining the integrity of the ocular surface. The following research was conducted with the intent of evaluating changes related to limbal stem-cell deficiency, as well as analyzing the results that canine amniotic membrane transplant, which was preserved in different solutions, had over this deficiency. The ulcer was induced by putting n-heptanol in contact with the corneal and limbal surface, associated to 360° conjunctival peritomy in rabbits; the following step was to cover the surface with canine amniotic membrane, secured to perilimbal episclera, cryopreserved in its own solution or embryo solution, both with 50% glycerol and stored at -80°C, with the exception of the control group, which was not treated with membrane. The animals were examined daily and morphologically at seven, 15 and 30 days. All of them developed signs of limbal stem-cell deficiency, entitled conjunctivalization, due to the occurrence of neovascularization, chronic inflammation and recurrent epithelial defects; during corneal histopathology it was observed the occurrence of neovascularization, edema, leukocytes and goblet cells. The amniotic membrane transplant was not efficient in the treatment of limbal stem-cell deficiency, however it did help in the process of cicatrisation, demonstrating to be more efficient when preserved in embryo solution. Key words: rabbits; cornea; cryopreservation; histopathology; amniotic membrane.