Ação do extrato bruto da Tabernaemontana catharinensis e de seu alcalóide isolado sobre as atividades de fosfolipases A2 ofídicas em preparação neuromuscular de camundongos

Abstract

As fosfolipases A2 (PLA2s) estão entre os principais componentes de venenos ofídicos, podendo representar até 60 % do conteúdo protéico destas secreções em algumas espécies. As clássicas (PLA2s Asp49) são enzimas dependentes de cálcio que hidrolisam a ligação ester sn-2 de glicerofosfofolipídeos de membrana liberando lisofosfolipídeos e ácidos graxos. Algumas variantes das PLA2s apresentam a substituição de resíduos críticos envolvidos na coordenação do co-fator Ca2+, dentre estas se destacam as PLA2 Lys49, cataliticamente inativas, que apresentam um resíduo de lisina na posição 49. As PLA2s ofídicas são capazes de promover uma ampla variedade de efeitos dentre os quais miotoxicidade e neurotoxicidade são os mais frequentemente observados. A despeito de serem catliticamente inativas, as PLA2s Lys49 induzem intensa mionecrose local. Embora sejam classificadas com miotoxinas não-neurotóxicas, estas promovem paralisia muscular in vitro. Recentemente sugeriu-se que estes efeitos promovidos pelas PLA2s Lys49 seriam decorrentes da ação desestabilizadora de membrana promovida por estas toxinas. Em contraste, as neurotoxinas PLA2s bloqueiam a transmissão neuromuscular in vivo e in vitro. Sugere-se que tal efeito seja consequência de ações pré e/ou pós-sinápticas. As PLA2s tem sido intensamente estudadas uma vez que os acidentes ofídicos ocasionam elevada morbidade e mortalidade em populações do mundo todo. Assim sendo, o presente estudo teve como objetivo avançar no entendimento dos mecanismos de ação bem como da relação entre a estrutura e a atividade de PLA2s ofídicas dos tipos Asp49 e Lys49. Para tanto, foram realizados estudos miográficos e morfológicos na preparação neuromuscular de camundongos utilizando a bothropstoxina-I (miotoxina, PLA2 Lys49 do veneno...

Phospholipases (PLA2s) are among the main toxic components of snake venoms, representing in some species about 60% of venoms protein. The classic PLA2s (Asp49 PLA2s) are calcium-dependent enzymes that hydrolises that the sn-2 acyl bond of glycerophospholipids, generating free fatty acids and lysophospholipids. Some variants of PLA2s present substitution of critical aminoacid residues involved in the coordenation of the co-factor calcium, as a consequence, enzymatic activity is drastically impaired. Among these variants, the Lys49 PLA2s present a lysine residue at position 49 and are catalytically inactive. Snake venvom PLA2s are able to promote a wide range of biological activity including myotoxicity and neurotoxicity. Despite their lack of enzymatic activity, Lys49 PLA2s induce severe local myonecrosis, and although they are non-neurotoxic myotoxins, the Lys49 PLA2s induce neuromuscular blockade in vitro. Recently, it was suggested that both the myotoxic and the paralysing effects promoted by Lys49 PLA2s are consequences of their membrane destabilizing activity. In contrast, the PLA2s neurotoxins block the neuromuscular transmission both in vivo and in vitro by means of presynaptic and/or postasynaptic actions. Snake venom PLA2s have been extensively investigated given that the snake bites are associated with high level of mortality worldwide. Thus, in the present work, we investigated the mechanisms of action and the sctructure-activity relationship of both Asp49 PLA2s and Lys 49 PLA2s. In this way, myographic and morphological studies were performed in mice neuromuscular preparations using bothropstoxin-I (a Lys49 PLA2 myotoxin from Bothrops jararacussu snake venom), crotoxin (a heterodimeric neurotoxin from Crotalus durissus terrific snake venom), as well as its Asp49 PLA2... (Complete abstract click electronic access below)