Caracterização de mutações no gene MED12, dos miRNAS mapeados em 7q22 e dos candidatos a regulação do gene HMGA2 em leiomiomas uterinos

Abstract

Leiomiomas uterinos (LU) são tumores benignos de origem mesenquimal frequentes sendo considerados um problema de saúde pública. A desregulação de fatores de crescimento e microRNAs, encurtamento dos telomeros, produção excessiva e desorganizada de matriz extracelular, perda de heterozigose e alterações cromossômicas recorrentes (como deleção em 7q22 e rearranjo cromossômico em 12q15) contribuem para o crescimento dos LU. Uma parcela significativa destes tumores apresenta mutação no gene MEDI2. O presente estudo teve como objetivo avaliar: a presença da mutação no MEDI2; o nível de expressão do HMGA2 e seus miRNAs preditos (let-7a, miR-26a, miR-26b); o nível de expressão do, cluster de miRNAs mapeado em 7q22 (miR-25, miR-93 e miR- 106b) e a expressão dos genes BRCAI, FANCA e seus miRNAs preditos. Foram avaliados 85 LU e 34 amostras de miométrio adjacentes obtidos de 54 pacientes submetidos à histerectomia. A análise de expressão por RT-qPCR foi realizada para os miR-let7a, miR-25, miR-93, miR-106b, miR-21, miR-26a, miR-26b, miR-197 e miR- 143, utilizando RNU44 , RNU48 e U47 como endógenos. Foi também avaliada a expressão dos genes HMGA2, BRCAI e FANCA sendo utilizados como controles endógenos RPLPO e GUSB. A mutação no MED12 foi encontrada em 50% (42/85) das amostras. Foi observado um aumento significativo (p<0,001) dos níveis de expressão do HMGA2 nos LU comparados ao miométrio adjacente, inclusive nas amostras com presença da mutação em MEDI2. Estes dados sugerem que o aumento de expressão do HMGA2 e a mutação em MEDI2 podem coexistir nestes tumores. Os miRNAs preditos para regular o HMGA2 apresentaram diminuição dos níveis de expressão: let-7a (p<O,OOl), miR-26a (p<O,OOl), miR-26b (p<O,OOl). A forte correlação negativa entre HMGA2 e seus miRNAs preditos suporta a evidência de interação entre eles. Os miRNAs mapeados...

Uterine Leiomyomas (UL) are common mesenchymal benign tumors that represent a significant public health problem. The deregulation of growth factors and microRNAs (miRNAs), shortening of telomeres, excessive production of disorganized extracellular matrix, loss of heterozygosity and recurrent chromosomal aberrations (including 7q22 deletion and chromosomal rearrangements in 12q 15) have been suggested to contribute to the growth of UL. A significant number of tumors presented mutations of MED I2The aims of this study were: to investigate MED12 mutation; to evaluate the expression levels of HMGA2 and their miRNAs predicted (let-7a, miR-26a, miR-26b); the expression of miRNAs mapped at 7q22 (miR-25, miR-93, and miR- 106b) and the expression levels of BRCAI, FANC,A and their predictive miRNAs. Eight-five fresh frozen UL and 34 adjacent normal myometrium (MM) were obtained from 54 patients who had undergone a hysterectomy procedure. Quantitative real time RT-PCR was applied to evaluate the expression levels of miRs (miR-let7a, miR-25, miR-93, miR- 106b, miR-21, miR-26a, miR-26b, miR-197 and miR-143) using RNU44, RNU48 and U47 as endogenous control and to evaluate the expression of HMGA2, BRCAI and FANCA using RPLPO and GUSB as endogenous control. We detected 50% (42/85) of samples with MEDI2 mutation. A significant overexpression (p<0,001) of HMGA2 was detected in UL compared with MM, including samples with the presence of MEDI2 mutation. These data indicated that overexpression of HMGA2 may coexist with MEDI2 mutation. The miRNAs predicted to regulate HMGA2 were found significantly downregulated: let-7a (p<0,001), miR-26a (p<0,001), miR-26b (p<0,001). The negative correlation verified between HMGA2 and their predicted miRNAs support the evidence of interaction between them. The miRNAs mapped at 7q22 (miR-25, miR-93, and miR- 106b) were found as downregulated... (Complete abstract click electronic access below)